このプロトコールは、腹部大動脈瘤の分子機構における病理学的特徴を研究するためのリン酸カルシウム誘発腹部大動脈瘤トリプルAマウスモデルを記載する。リン酸カルシウム誘発腹部大動脈瘤モデルは、アンジオテンシンチューブおよびエラスターゼ誘発腹部大動脈瘤モデルと比較して迅速で費用効果の高いモデルです。手順を実演するのは、私たちの研究室のフェローであるここのポスドクターであるZeyu Caiです。
開始するには、幅0.3センチのパウダーフリーゴム手袋とガーゼをカットします。次に、8〜10週齢のC57BL6Jメイヨーマウスを購入し、12時間の明るい暗サイクルと食物と水への自由なアクセスを備えたエアコン付きの環境に動物を収容します。次に、手術前にガーゼ、綿棒、はさみ、鉗子をオートクレーブし、ベタジン、70%エタノール、消毒手洗い液を入手します。
麻酔をかけたマウスの腹毛を電気バリカンまたは脱毛クリームで剃ります。次に、ベタジンで剃った部分を綿棒で拭き取り、続いて70%エタノールを円を描くように数回拭きます。次に、ハサミを使用して腹部の正中線に沿って下腹部を約1.5センチメートル切開します。
通常の生理食塩水で湿らせた滅菌綿棒を使用して、腎下大動脈が見えるまで腸を慎重に取り除きます。次に、腎下大動脈の結合組織と脂肪を約0.5センチメートルの切片で解剖し、背側の小血管の裂け目を避けます。次に、生理食塩水を染み込ませたゴム手袋ストリップを腹部大動脈と腹部主静脈の下に詰め、綿棒を使用して余分な液体を拭き取ります。
その後、0.5モルの塩化カルシウムを浸したガーゼを腎下腹部血管系の外膜に10分間詰めます。ガーゼを取り出し、PBS溶液に浸した別のガーゼを5分間詰めて、大動脈の外膜にC2にオルトリン酸カルシウム結晶を生成します。次に、ゴム手袋のストリップとガーゼを慎重に取り外します。
マウスの腸管をリセットした後、腹部切開部と皮膚を5ゼロ縫合糸で縫合する。次に、マウスが意識を取り戻すまで、マウスを加熱パッドの上に置きます。マウスをさらに14日間飼育し、手術後にマウスを注意深く監視し、その後は少なくとも毎日観察します。
手術の14日後、安楽死させたマウスの胸腔と腹腔を腹側に切り開き、右心房を切り開いた。心臓の左心室を通してPBSバッファーをマウスに大量に注入して大動脈の血液を除去し、原稿に記載されているように4%パラホルムアルデヒドを灌流します。外膜組織と脂肪を実体顕微鏡で慎重に取り除きます。
次に大動脈を採取し、5ミリリットルの4%パラホルムアルデヒドを含むチューブに48時間入れます。次に、昆虫の針で黒いワックスプレートに大動脈を固定し、大動脈画像の取得に進みます。オルトリン酸カルシウムの塗布の14日後、大動脈の形態を画像化し、腹部大動脈瘤の形成を視覚化した。
オルトリン酸カルシウムは腹部下大動脈の拡張を引き起こし、エラスチンの切断に代表されるように弾性線維の劇的な劣化をもたらすことが観察された。通常の生理食塩水で湿らせた滅菌綿棒を使用して、腎下大動脈が見えるまで腸を取り除き、次に腎下大動脈から結合組織と脂肪を抽出します。全体として、リン酸カルシウム誘発マウス腹部大動脈瘤モデルは、腹部大動脈瘤の分子メカニズムと治療戦略を探求するための迅速かつ費用効果の高いアプローチであり、他のモデルと並行して適用して、人間の腹部大動脈瘤の特徴を完全に模倣することができます。
