慢性沙门氏菌感染小鼠模型

摘要

建立一个持久的慢性细菌感染的小鼠模型沙门氏菌 27周鼠伤寒肠道定植。

摘要

细菌感染的小鼠模型是一个强大的模型系统研究，如感染，炎症，免疫学，信号转导和肿瘤等领域。许多研究人员都采取诱导的结肠炎的优势

研究方案

该协议包括三部分：细菌培养，小鼠灌胃，检测和沙门氏菌 。

1。 沙门氏菌的生长条件。

1. 准备沙门氏菌卢里亚Bertani肉汤（LB）板，37℃过夜孵育。
2. 从LB平板克隆选择和投入7毫升LB培养基，在12毫升管，并在37 ° C为5小时左右摇晃。
3. 固定相的文化和​​孵化用0.05毫升50毫升LB培养基，接种于37 ° C，不摇晃时间约18小时。
4. 自旋在室温下过夜的细菌培养，10分钟6000转，暂停使用比率100:3（LB：HBSS）的HBSS的细菌。例如：
   每50毫升LB培养将暂停在1.5毫升的HBSS。
5. 对于动物灌胃，进一步在1:10的比例稀释的细菌培养。例如：
   每1.5毫升LB培养将暂停在15毫升的HBSS。

2。 沙门氏菌感染模型*.

1. 准备链霉素溶液。每个鼠标将在100μL的HBSS 7.5毫克链霉素。例如，准备10只小鼠在1.2毫升的HBSS总链霉素90毫克。准备链霉素溶液时，总是有一些额外的体积。
2. 水和食物4小时之前撤回灌胃治疗。
3. 链霉素（100μL对照组小鼠的HBSS）7.5毫克链霉素灌胃的小鼠。牢牢抓住用大拇指和中指在鼠标肩的皮肤，舒展的头部和颈部，用食指伸直，使食道。直接喂养针沿口的屋顶，向咽后部的右侧球头，然后轻轻地向下传递到食道，并注入100μL解决方案。应该感到无电阻。
4. 链霉素治疗后，被撤回的水和食物与细菌感染小鼠前再次的20小时。
5. 灌胃100μL悬浮在HBSS中每个鼠标或用无菌的HBSS（对照组）灌胃治疗。灌胃过程是相同的2.3）灌胃小鼠，用链霉素。

*动物实验，通过使用无特定病原体的雌性C57BL / 6小鼠（泰康利，哈德森，NY）6-7周龄，正如先前所^描述的1。该协议被批准，由美国罗切斯特大学委员会的动物资源（UCAR）大学。

3。肠道沙门氏菌检测。

1. 收集小鼠粪便（约100毫克）。
2. 粪便样品转移到1.5微离心管中，用1ml PBS和涡大力。
3. 离心10分钟800转。上清液转移到一个干净的离心管。
4. 离心5分钟转速6000。丢弃上清液200μL的PBS添加到颗粒和振荡。
5. 数的200μLPBS与一次性细胞吊具上BBL CHROMagar板检测沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色（上升到紫色，参见图1）。如果200μL产量上盘太多的殖民地，使用100μL或50μL的连胜纪录。

4。代表性的成果。

鼠伤寒沙门氏菌的定植是正确的协议时，可以在小鼠小肠中检测到6个月以上的沙门氏菌可通过粪便文化检测6个月以上（图1 ）。作为一个典型的出这种模式，车身重量损失和死亡，感染后4个星期内发生。依赖感染沙门氏菌株，有些老鼠可能无法存活超过6个月。

图1。肠道沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色上升到紫色的颜色，由于代谢差异的存在，在选定chromogens的。是抑制其他细菌或产生蓝绿色或无色菌落。

图2。感染沙门氏菌突变株PhoP ^{C，PhoP彗星}的小鼠的存活比例阿夫拉， ^和 PhoP彗星AvrA-/AvrA ⁺ PhoP彗星阿夫拉4周（28天）。

表1。 沙门氏菌感染4周的小鼠的体重。

	0	1个星期	2个星期	3个星期	4周
控制	16.78 ± 1.05	16.91 ± 1.28	18.26 ± 1.23	19.31 ± 1.26	20.26 ± 1.15
PhoP 彗星	16.89 ± 1.03	17.14 ± 1.19	17.43 ± 1.63 *	18.68 ± 1.78	20.05 ± 1.11
PhoP 彗星阿夫拉，	16.91 ± 1.12	16.96 ± 1.39	17.06 ± 2.14 **	18.71 ± 2.18	20.15 ± 1.56
PhoP 彗星 AvrA-/AvrA +	16.94 ± 0.96	17.17 ± 1.02	17.63 ± 1.42 *	18.44 ± 2.03	20.09 ± 1.17

*与对照组比较P <0.05
**相比，对照组P <0.01

表2。 沙门菌在这项研究中使用。

名称	说明	参考或来源
沙门氏菌 14028s	野生型S.鼠伤寒沙门氏菌	ATCC
PhoP 彗星	非致病性的复杂的调节突变	米勒等人，1990年
PhoP 彗星阿夫拉，	阿夫拉的突变	科利尔- Hyams等，2002年
PhoP 彗星 AvrA-/AvrA +	PhoP 彗星阿夫拉补充质粒编码阿夫拉	科利尔- Hyams等，2002年

讨论

使用这个系统，它的研究人员，以了解如何灌胃动物是必要的。我们详细准备细菌培养和灌胃的小鼠的一种方法。我们还展示了如何监测在胃肠道（GI） 的沙门氏菌持久。在这个协议中的关键步骤包括：

1. 链霉素预处理：链霉素预处理可以摆脱一些共生的肠道菌群，使小鼠受到沙门氏菌 ^感染 2 。
2. 沙门氏菌灌胃：对于初学者来说，灌胃可以是具有挑战性?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
HBSS	Sigma-Aldrich	ABCD1234
Luria-Bertani broth	BD Biosciences	244610
Feeding needle	Popper & Sons, Inc.	7920
Streptomycin	MP Biomedicals	100556
BBL CHROMagar Salmonella	BD Biosciences	214983
Disposable cell spreaders	Biologix Research Company	65-1010