만성의 살모넬라균 감염된 마우스 모델

요약

영구와 만성 세균 감염 마우스 모델 수립 살모넬라균 typhimurium의 식민지.

초록

세균성 감염 마우스 모델은 감염, 염증, 면역학, 신호 전달, 그리고 tumorigenesis과 같은 분야를 공부를위한 강력한 모델 시스템입니다. 많은 연구자에 의해 유도된 대장염의 이점을 데리고

프로토콜

세균성 문화, 마우스 gavage 및 살모넬라균 검출이 프로토콜은 세 부분을 포함하고 있습니다.

1. 살모넬라균의 성장 상태.

1. ° C 야간 37 품어 살모넬라균 Luria - Bertani 국물 (LB) 접시를 준비합니다.
2. LB 판에서 복제를 선택하고 12 ML 튜브 7 ML의 LB에 넣어 37 ° C 약 5 시간 동안 흔들.
3. 약 18 시간 동안 떨지 않고 37 ° C에서 고정 상 문화와 부화의 0.05 ML과 함께 50 ML의 LB의 예방.
4. 비율 100:3을 (HBSS LB)를 사용하여 HBSS에있는 박테리아를 중단, 10 분 6,000 RPM과 함께 실온에서 하룻밤 박테리아 문화를 스핀. 예를 들면 다음과 같습니다
   모든 50 ML의 LB 문화는 1.5 ML의 HBSS에 일시 중지됩니다.
5. 동물 gavage 경우, 추가 1시 10분 비율 박테리아 문화를 희석. 예를 들면 다음과 같습니다
   모든 1.5 ML의 LB 문화 15 ML의 HBSS에 일시 중지됩니다.

2. 살모넬라균 감염 모델 *

1. 스트렙토 마이신 솔루션을 준비합니다. 각각의 마우스는 100 μl HBSS에 스트렙토 마이신의 7.5 MG를 받게 될 것입니다. 예를 들어, 10 마우스에 대한 1.2 ML HBSS에 스트렙토 마이신 총 90 MG를 준비합니다. 스트렙토 마이신 솔루션을 준비할 때 항상 몇 가지 여분의 볼륨을했습니다.
2. 구두 gavage 치료를 받기 전에 물과 음식을 4 시간 철수.
3. 스트렙토 마이신 (제어 마우스에 대한 HBSS 100 μl)의 7.5 MG로 스트렙토 마이신과 Gavage 쥐. 똑바로 식도를 만들기 위해 검지로 머리와 목 스트레칭, 단단히 엄지와 가운데 손가락으로 마우스 어깨 위에 피부를 잡아. 입천장을 따라와 인두의 뒤쪽의 오른쪽 방향으로 먹이 바늘의 볼 - 팁을 직접 다음, 부드럽게 식도로 아래로 통과하고 100 μl 솔루션을 주입. 아무 저항도 느끼지해야합니다.
4. 스트렙토 마이신 처리, 철회 물, 생쥐는 박테리아에 감염된 음식을 다시하기 전에 이후 20 시에.
5. HBSS 100 μl 현탁액 각 마우스를 Gavage 또는 경구 gavage에 의해 멸균 HBSS (제어)와 치료. gavage 절차는 스트렙토 마이신과 같은) 2.3로 gavage 마우스입니다.

* 동물 실험은 특정 - 병원체가없는 여성 C57BL / 이전 ¹ 설명된대로 6~7주 살 때 6 쥐 (타코닉, 허드슨, NY)를 사용하여 수행되었습니다. 프로토콜은 동물 자원 (UCAR)에서 로체스터 대학위원회의 대학에 의해 승인되었습니다.

3. 소장에서 살모넬라균의 검출.

1. (100 MG) 마우스 배설물 수집합니다.
2. 적극적으로 1ml PBS와 소용돌이와 1.5 마이크로 원심 튜브에 배설물 샘플을 전송합니다.
3. 800 RPM 10 분 원심 분리기. 깨끗한 microfuge 튜브에 뜨는을 전송합니다.
4. 5 분을 위해 6,000 rpm으로 원심 분리. 뜨는은 삭제됩니다 200 μL PBS는 쥐똥에 추가 vortexed됩니다.
5. 살모넬라균을 검출 BBL CHROMagar 접시에 일회용 휴대 확장기와 리크 200 μl PBS가. 살모넬라균 종은 (보라색으로 장미, Fig.1 참조) 자주빛 나타납니다. 200 μl 산출하면 접시에 너무 많은 식민지는 100 μl 또는 연속 50 μl를 사용합니다.

4. 대표 결과.

프로토콜이 제대로되면 살모넬라균 typhimurium의 식민지가 6 개월 이상 마우스 소장에서 검색된 수 있습니다. 살모넬라균은 6 개월 (Fig.1)을 통해 지저분한 문화에 의해 감지 수 있습니다. 전형적인 아웃이 모델의 결과로서, 몸은 상실과 죽음 4 주 이후에 감염 내에서 발생하는 무게. 감염에 사용되는 살모넬라균의 변종에 따라, 일부 마우스는 6 개월 이상 생존할 수 없습니다.

그림 1. 살모넬라균의 종의 창자 살모넬라균 인해 선택 chromogens의 존재에 신진 대사의 차이로 색상 (퍼플 로즈) 자주빛 나타납니다. 다른 박테리아가 어느 저해 또는 파란색 - 녹색 또는 무색의 식민지를 생산하고 있습니다.

그림 2. 살모넬라균 돌연변이 스트레인 PhoP ^{C, C} PhoP에 감염된 마우스의 생존 비율 아브라 -, 그리고 PhoP ^C AvrA-/AvrA +, 사주 (28 일) PhoP ^C 아브라.

4 주 동안 살모넬라균에 감염된 생쥐의 표 1. 체중.

	0	일주	이주	삼주	사주
제어	16.78 ± 1.05	16.91 ± 1.28	18.26 ± 1.23	19.31 ± 1.26	20.26 ± 1.15
PhoP C	16.89 ± 1.03	17.14 ± 1.19	17.43 ± 1.63 *	18.68 ± 1.78	20.05 ± 1.11
PhoP C 아브라 -	16.91 ± 1.12	16.96 ± 1.39	17.06 ± 2.14 **	18.71 ± 2.18	20.15 ± 1.56
PhoP C AvrA-/AvrA +	16.94 ± 0.96	17.17 ± 1.02	17.63 ± 1.42 *	18.44 ± 2.03	20.09 ± 1.17

* 그룹 P에게 <0.05를 제어 비교
** 그룹 P <0.01를 제어 비교

표 2. 살모넬라균의 변종이 연구에 사용.

이름	설명	참조 또는 소스
살모넬라균 14028s	야생 형 S. typhimurium	ATCC
PhoP C	돌연변이 비 병원성 복잡한 조절기	밀러 외., 1990
PhoP C 아브라 -	아브라 - 돌연변이	콜리 - 하이엄스 외., 2002
PhoP C AvrA-/AvrA +	PhoP C 보완 플라스미드 인코딩 아브라 ​​아브라 -로	콜리 - 하이엄스 외., 2002

토론

이 시스템을 사용하려면, 그것은 동물을 gavage하는 방법을 알아보려면 연구자가 필요합니다. 박테리아 문화를 준비하고 쥐를 gavage 위해 우리는 세부 방법론을. 우리는 또한 위장 (GI) 트랙트에서 살모넬라균 지속성을 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 포함이 프로토콜의 중요한 단계

1. 스트렙토 마이신 - 전처리 : 스트렙토 마이신 - 전처리 일부 공생 굿 식물 제거 및 살모넬라균 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
HBSS	Sigma-Aldrich	ABCD1234
Luria-Bertani broth	BD Biosciences	244610
Feeding needle	Popper & Sons, Inc.	7920
Streptomycin	MP Biomedicals	100556
BBL CHROMagar Salmonella	BD Biosciences	214983
Disposable cell spreaders	Biologix Research Company	65-1010