改良尾静脉和静脉穿刺用于大鼠模型中的血液采样

摘要

在这里，我们提出了一种协议，为大鼠模型提供快速，简单和可靠的血液采集替代方案。我们根据上下文描述了三种不同的血液采样方法：麻醉下或有意识的动物的尾静脉穿刺，以及麻醉下的背静脉穿刺。

摘要

大多数实验动物设计都需要血液样本来评估各种血液学参数。本文介绍了两种大鼠采血程序：侧尾静脉穿刺和背静脉穿刺，与其他先前描述的技术相比具有显着优势。该研究表明，这两种程序允许快速采样（10 分钟内）并为大多数测定（202 μL ± 67.7 μL）产生足够的血容量。背静脉穿刺必须在麻醉下进行，而侧尾静脉穿刺可以在有意识、约束的动物身上进行。

因此，交替使用这两种技术可以在任何情况下抽血。虽然始终建议在手术过程中协助操作员以确保动物福利，但这些技术只需要一名操作员，这与大多数需要两名血液采样方法不同。此外，虽然这些先前描述的方法（例如颈静脉棒，锁骨下静脉抽血）需要广泛的事先训练以避免动物的伤害或死亡，但尾静脉和背静脉穿刺很少是致命的。由于所有这些原因，并根据具体情况（例如，对于包括雄性大鼠的研究，在围手术期或术后立即，对于尾静脉细的动物），这两种技术可以交替使用以实现重复抽血。

引言

血液采样对于大多数动物研究都是必要的，无论是 体内 还是 体外。在大鼠中，由于血液采样的频率和数量可能很大，因此有不同的收集选择是有帮助的。在以前的研究中已经描述了各种方法。

最常用的技术是尾静脉穿刺和大隐静脉抽血。尾静脉取样适用于所有大鼠品系。通过适当的训练，该程序易于执行，并且对动物造成的痛苦最小¹.同样，大隐静脉抽血，只要操作得当，也是一种快速简单的采集方法。这两种方法都不需要麻醉，并且都允许重复抽取少量血液。然而，大隐静脉穿刺通常产生较低的血容量¹ ，并且需要两个人在场，留下一个后肢暴露进行穿刺²。

如果需要从单个动物收集大量血液，可以使用心脏穿刺或腔静脉穿刺（可以从心脏穿刺的 150 g 大鼠中抽取多达 10 mL 的血液²）。这些技术需要麻醉，并且是终末程序。在这两种技术中的任何一种之后，动物都必须被安乐死².颈静脉棒是一种替代方案，如果在尚未达到终点的研究中需要收集大量血液，可以使用。然而，这种技术还需要大量的技术技能来避免对动物造成伤害;因此，应限制其使用³。

研究方案

该程序在3个月大的雄性刘易斯大鼠上进行，每只重300-400克。共纳入24只动物，具有3种穿刺条件：12只大鼠在无麻醉的情况下进行尾静脉穿刺（组TV无麻醉），另外12只大鼠被麻醉进行尾静脉穿刺（组TV麻醉）和静脉穿刺（组PV麻醉）。所有程序均已获得批准，并遵守机构动物护理和使用委员会（IACUC）的指导方针。所有动物在研究结束时（随访1个月后）通过二氧化碳过量被安乐死。有关与本协议中使用的所有材料和仪器有关的详细信息，请参阅 材料表 。

1. 一般准则

1. 根据 IACUC 指南，确保每 2 周抽取的最大血容量不超过总血容量的 10%⁹。例如，一只 300 g 的大鼠的总血容量应约为 19.2 mL。对于仅在第一周（第 0 天、第 1 天、第 3 天、第 7 天）需要抽血四次的方案，请将每个样品的采集限制为最多 250 μL。
2. 对于在麻醉下进行的手术，通过精密蒸发器 施 用异氟醚以麻醉动物。在剂量为3%-5%异氟醚的腔室中诱导麻醉5分钟，并在手术过程中通过鼻锥使用1%-3%异氟烷的剂量维持。根据呼吸频率的连续监测调整异氟烷水平。在开始手术之前，通过捏住脚趾来验证镇静是否足够。
3. 在手术过程中或直到动物恢复足够的意识以维持胸骨卧位之前，不要让动物无人看管。
4. 采血后，监测动物....

讨论

尾静脉穿刺是从有意识的大鼠身上获取血液的有效方法。然而，当动物处于麻醉状态时，异氟醚的作用会导致血管痉挛，并使尾静脉穿刺不合适¹¹。如本研究所示，在这种情况下的另一种选择是从静脉收集血液，这更成功，并且在更短的时间内产生显着更大的血液量。请务必记住，如果此方法在第一次尝试时失败，则后续尝试可能会失败。相比之下，尾静脉穿刺允许在第一次尝?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.5 mL | 28 G ½  Insulin Syringes	BD	329424	for tail vein puncture
0.5 mL | 30 G x 5/16 Insulin Syringes	BD	320468	for penile vein puncture
250 L  Microtainer blood collection tubes with K2EDTA	BD	365974
Gauze Sponges	Curity	6939
Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine	E-Z Systems	EZ-190F	for penile vein puncture
Isoflurane, USP	Patterson Veterinary	1403-704-06	for penile vein puncture
Nosecone for Anesthesia	World Precision Instruments	EZ-112	for penile vein puncture
Rodent Restraint Cone	Harvard Apparatus	ST2 52-95-86	for tail vein puncture
Small Animal Heated Operating Table (Adjustable)	Peco Services Ltd	69023
Webcol Alcohol prep pads	Simply Medical	5110