쥐 모델에서 혈액 샘플링을 위한 수정된 꼬리 정맥 및 음경 정맥 천자

요약

여기에서 우리는 쥐 모델에 대해 빠르고 쉽고 신뢰할 수 있는 채혈 대안을 제공하는 프로토콜을 제시합니다. 우리는 문맥에 따라 세 가지 다른 혈액 샘플링 방법을 설명합니다: 마취 또는 의식이 있는 동물에 대한 꼬리 정맥 천자, 마취 하에 등쪽 음경 정맥 천자.

초록

혈액 샘플은 다양한 혈액학적 매개변수를 평가하기 위해 대부분의 실험 동물 설계에서 필요합니다. 이 논문은 쥐의 채혈을 위한 두 가지 절차인 측면 꼬리 정맥 천자와 등쪽 음경 정맥 천자를 제시하며, 이는 이전에 설명한 다른 기술에 비해 상당한 이점을 제공합니다. 이 연구는 이 두 가지 절차가 빠른 샘플링(10분 미만)을 허용하고 대부분의 분석(202μL ± 67.7μL)에 충분한 혈액량을 산출한다는 것을 보여줍니다. 등쪽 음경 정맥 천자는 마취하에 이루어져야 하는 반면, 측면 꼬리 정맥 천자는 의식이 있고 억제된 동물에게 할 수 있습니다.

따라서 이 두 가지 기술을 번갈아 가며 사용하면 어떤 상황에서도 혈액을 채취할 수 있습니다. 동물 복지를 보장하기 위해 시술 중에 시술자의 도움을 받는 것이 항상 권장되지만, 이러한 기술은 두 명이 필요한 대부분의 혈액 샘플링 방법과 달리 한 명의 시술자만 필요합니다. 또한, 이전에 설명된 이러한 방법(예: 경정맥 스틱, 쇄골하 정맥 채혈)은 동물의 피해 또는 사망을 피하기 위해 광범위한 사전 훈련이 필요한 반면, 꼬리 정맥 및 등쪽 음경 정맥 천자는 거의 치명적이지 않습니다. 이러한 모든 이유와 상황에 따라(예: 수컷 쥐를 포함한 연구의 경우, 수술 전후 또는 수술 직후 기간, 꼬리 정맥이 얇은 동물의 경우) 두 기술을 번갈아 사용하여 반복적인 채혈을 가능하게 할 수 있습니다.

서문

혈액 샘플링은 생체 내 및 시험관 내 대부분의 동물 연구에 필요합니다. 쥐의 경우 혈액 샘플링의 빈도와 양이 중요할 수 있으므로 수집을 위한 다른 대안을 갖는 것이 도움이 됩니다. 이전 연구에서 다양한 방법이 설명되었습니다.

가장 일반적으로 사용되는 기술은 꼬리 정맥 천자와 복재 정맥 채혈입니다. 꼬리 정맥 샘플링은 모든 쥐 균주에 적합합니다. 적절한 훈련을 통해 절차는 수행하기 쉽고 동물에게 최소한의 고통을 유발합니다¹. 마찬가지로, 복재 정맥 채혈은 제대로 수행된다면 빠르고 간단한 수집 방법입니다. 두 방법 모두 마취가 필요하지 않으며 둘 다 소량의 혈액을 반복적으로 채취 할 수 있습니다. 그러나, 복재정맥 천자는 일반적으로 혈액량이 더 적고¹ 한쪽 뒷다리가 펑크를 위해 노출된 채로 두기 위해 두 사람이 있어야 한다².

단일 동물에서 많은 양의 혈액을 채취해야 하는 경우 심장 천자 또는 대정맥 천자를 사용할 수 있습니다(심장 천자²가 있는 150g 쥐에서 최대 10mL의 혈액을 채취할 수 ....

프로토콜

절차는 각각 무게가 300-400g인 3개월 된 수컷 루이스 쥐에서 수행되었습니다. 총 24마리의 동물이 포함되었으며, 3가지 천자 조건이 포함되었다: 12마리의 쥐는 마취 없이 꼬리 정맥 천자를 받았고(마취 없는 그룹 TV), 다른 12마리의 쥐는 꼬리 정맥 천자(마취가 있는 그룹 TV)와 음경 정맥 천자(마취가 있는 그룹 PV)를 모두 받기 위해 마취되었다. 모든 절차는 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee) 지침을 승인하고 존중했습니다. 모든 동물은 연구 종료 시(1개월 추적 관찰 후) 이산화탄소 과다 복용에 의해 안락사되었습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료 및 기기와 관련된 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.

1. 일반 지침

1. IACUC 가이드라인에 따라, 2주마다 최대 혈액량이 총 혈액량의 10%를 넘지 않도록 한다⁹. 예를 들어, 300g의 쥐는 약 19.2mL의 총 혈액량을 가져야합니다. 첫 주에만 4번의 채혈이 필요한 프로토콜의 경우(0일, 1일, 3일, 7일) 채혈을 제한하는 경우 샘플당 최대 250μL의 혈액으로 채취를 제한합니다.

토론

꼬리 정맥 천자는 의식이 있는 쥐에게서 혈액을 얻는 효율적인 방법입니다. 그러나, 동물이 마취 상태에 있을 때, 이소플루란의 효과는 혈관 경련을 일으키고 꼬리 정맥 천자를 부적절하게 만들 수 있다¹¹. 이 연구에서 볼 수 있듯이 이 상황의 대안은 음경 정맥에서 혈액을 채취하는 것인데, 이는 더 성공적이고 더 짧은 시간에 훨씬 더 많은 양의 혈액을 생성합니다. 첫 번째 시도?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.5 mL | 28 G ½  Insulin Syringes	BD	329424	for tail vein puncture
0.5 mL | 30 G x 5/16 Insulin Syringes	BD	320468	for penile vein puncture
250 L  Microtainer blood collection tubes with K2EDTA	BD	365974
Gauze Sponges	Curity	6939
Isoflurane Auto-Flow Anesthesia Machine	E-Z Systems	EZ-190F	for penile vein puncture
Isoflurane, USP	Patterson Veterinary	1403-704-06	for penile vein puncture
Nosecone for Anesthesia	World Precision Instruments	EZ-112	for penile vein puncture
Rodent Restraint Cone	Harvard Apparatus	ST2 52-95-86	for tail vein puncture
Small Animal Heated Operating Table (Adjustable)	Peco Services Ltd	69023
Webcol Alcohol prep pads	Simply Medical	5110