单碘乙酸钠注射液诱导膝骨关节炎大鼠模型的推拿干预

摘要

本方案描述了单碘乙酸钠注射液诱导的膝骨关节炎（KOA）大鼠模型中的推拿干预方法，为推拿在KOA动物模型中的应用提供了参考。该方案还研究了推拿治疗KOA的有效机制，其结果将有助于促进其应用。

摘要

膝骨关节炎 （KOA） 是一种常见的退行性关节疾病，其特征是慢性疼痛和残疾，可发展为无法修复的关节结构损伤。研究关节软骨、肌肉、滑膜和 KOA 膝关节周围其他组织之间的联系非常重要。目前，管理 KOA 包括改变生活方式、运动、药物治疗和手术干预;然而，仍然缺乏对KOA相关疼痛的复杂机制的阐明。因此，KOA疼痛仍然是一个关键的临床挑战和治疗重点。推拿已被发现对运动、免疫和内分泌系统有调节作用，促使人们探索推拿是否可以缓解由炎症因子上调引起的 KOA 症状，以及骨骼肌中的炎症因子是否可以增强 KOA 的进展。

我们将 32 只雄性 Sprague Dawley （SD） 大鼠 （180-220 g） 随机分为四组，每组 8 只动物：抗 PD-L1+推拿（A 组）、模型（B 组）、推拿（C 组）和假手术（D 组）。对于A组、B组和C组，我们将25 μL单碘乙酸钠（MIA）溶液（4 mg MIA稀释在25 μL无菌盐水溶液中稀释）注射到右膝关节腔中，对于D组，注射等量的无菌生理盐水。所有组均在注射前和注射后 2、9 和 16 天使用压力最小到最大的测试（爪子机械戒断阈值、爪子撤出热潜伏期、右膝关节肿胀、Lequesne MG 评分、皮肤温度）进行评估。

引言

膝骨关节炎（KOA）是一种常见的退行性骨关节炎，以慢性疼痛和残疾为特征，相对严重的KOA会导致关节不可逆的结构性损伤¹。KOA 的全球高患病率已成为全球公共卫生的重大挑战^2,3，^严重损害患者的生活质量 ^4,5。研究表明，KOA 影响着全球超过 2.6 亿人⁶。随着人口老龄化，我国40岁以上KOA总患病率高达17.0%，给受影响者的家庭带来了沉重的负担^7,8。

根据中医的说法，KOA属于“麻痹”的范畴⁹，《黄帝内科经》将肌腱、骨骼和肉与麻痹联系在一起。因此，我们需要注意 KOA 中软骨、肌肉、滑膜以及膝关节周围其他组织之间的联系。在现代医学中，肌肉和骨骼炎症是关节炎免疫稳态的主要组成部分，它们推动了 KOA 疼痛的进展。然而，大多数研究集中在骨关节的软骨炎症和滑膜炎症上，并且缺乏研究骨骼肌炎症现象的文章。因此，需要对骨骼肌在炎症中的作用进行更多研究，以更全面地了解KOA，并为更有效的治疗方....

研究方案

所有实验均经上海中医药大学动物护理与使用专业委员会（批准文号：SYXK2018-0040）批准和监督，符合世界医学会赫尔辛基宣言的规定。

1. 动物准备

1. House 32 Sprague Dawley （SD） 雄性大鼠，年龄为 8 周，体重 180-220 g，在特定的无病原体饲养装置中，在 24 ± 2 °C 和 60% 湿度下，在 12 小时光照/12 小时黑暗循环下，标准啮齿动物颗粒饮食。所有动物实验操作均符合实验动物福利伦理和动物实验安全规定。
2. 适应性喂养1周后，将大鼠随机分成四组，每组8只动物：抗PD-L1 +推拿（A组），模型（B组），推拿（C组）和假手术（D组）。

2.膝关节内注射碘乙酸钠（MIA）

注：除D组外，KOA大鼠模型将通过膝关节腔注射MIA在所有组中制备。对于 D 组，将 25 μL 无菌生理盐水注射到右膝关节腔中。

1. 通过将大鼠置于麻醉笼中，然后引入2.5%异氟醚直至完全麻醉来麻醉大鼠。等待幼鼠仰卧、四肢停止移动、脚趾捏合（踏板反射）、睑反射和肌肉松弛无反应时，确认动物已完全麻醉。
2. 在麻醉的幼鼠中加入宠物眼膏和眼药水，以防止眼睛干涩。
3. 剃掉大鼠的右后肢，并用三轮....

讨论

本研究旨在通过使用标准化的行为指标评估推拿干预后 KOA 的改善情况，并探讨推拿治疗 KOA 的机制以及骨骼肌与 KOA 的关联。与药物和手术治疗不同，推拿对运动、免疫和内分泌系统有积极的调节作用。推拿可以通过作用于不同的靶点来缓解疾病引起的炎症和疼痛。例如，通过调节TLR4通路和miRNA，它可以抑制神经胶质细胞的活化，调节脑功能改变，调节下游炎性细胞因子，抑制外周炎症

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anti-PD-L1	Abcam, Cambridge, MA, USA	ab80276
electric von Frey esthesiometer	IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA	ALMEMO 2450
GraphPad Prism 9.0	GraphPad Software		Software for stastistical analysis
monosodium iodoacetate	Sigma-Aldrich Inc	I9148	Resolved into normal saline for injection
pentasorbital sodium	Sigma-Aldrich Inc	P3761
Sprague Dawley (SD) male rats	Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd	No. SCXK (Hu) 2017-0012
thermal analgesia tester	IITC/Life Science	Model 390