基于蒙古药的大鼠慢性不可预测的轻度应激

摘要

该协议概述了基于蒙古医学理论的抑郁症慢性不可预测轻度压力 （CUMS） 模型，以及验证行为测试的方法。

摘要

抑郁症是一种普遍存在的情感障碍，是导致全球残疾的主要原因。目前药物干预的局限性导致了这种疾病带来的巨大健康负担。迫切需要更深入地了解抑郁症的潜在机制，这使得具有转化潜力的临床前模型非常有价值。蒙古医学是传统医学的一个分支，认为疾病的发生与风、胆汁和痰液的平衡密切相关。在这项研究中，我们介绍了大鼠慢性不可预测的轻度应激（CUMS）方法的方案。在这个框架内，大鼠受到一系列波动的、温和的压力源的影响，以诱导出类似抑郁症的表型，模仿人类抑郁症的发病机制。该协议中采用的行为测定包括蔗糖偏好测试 （SPT），表明快感缺乏——抑郁症的核心症状;测量焦虑水平的旷场测试（OFT）;以及评估空间记忆和学习能力的莫里斯水迷宫测试（MWM）。CUMS 方法证明了诱导快感缺乏和导致长期行为缺陷的能力。此外，与其他旨在引发抑郁样行为的动物模型相比，该协议更符合蒙古医学理论。这种动物模型的开发和后续研究为蒙古医学领域未来的创新研究奠定了坚实的基础。

引言

重度抑郁症 （MDD） 是一种普遍存在的精神疾病，是全球第三大残疾原因，影响着超过 3 亿人^1,2,3.值得注意的是，据估计，至少有一半的受影响个体没有得到充分的治疗⁴.鉴于这一差距，动物模型可以作为调查抑郁症病因的重要工具。迄今为止，存在 20 多种不同的抑郁症动物模型⁵.其中，Paul Winer 于 1987 年改进的慢性不可预测的轻度压力 （CUMS） 模型是最常用的⁶.CUMS 模型的前提是，将啮齿动物暴露于各种社会环境压力源会导致类似于焦虑、紧张和抑郁的症状。该方法涉及在几周内将动物暴露于各种轻度压力源中，最终导致一系列行为改变，包括快感缺乏和抑郁样行为^7,8.这些变化伴随着内分泌和神经递质谱的变化，例如 5-HT 的减少^9,10.这些结果与在被诊断患有MDD的人类中观察到的结果非常相似，从而验证了该模型的实用性。CUMS 模型因其在评估抗抑郁药方面的有效性而受....

研究方案

实验方案获得了内蒙古医科大学（YKD202301172）动物实验护理伦理委员会的批准，并遵守了美国国立卫生研究院的动物护理和伦理指南。我们动物中心的许可证号是NO.110324230102364187。获得 24 只雄性 Sprague-Dawley （SD） 大鼠，每只 8 周龄 （200 g ± 20 g），并将其饲养在温度为 22°C ± 2°C，湿度为 55% ± 15% 的受控环境中。用啮齿动物维持饲料喂养大鼠，用玉米芯喂养饲料和纯净水作为垫料。在实验前，将大鼠置于12小时/ 12小时的光/暗循环中1周。

1. CUMS大鼠模型的建立

1. 分组
   1. 将 24 只大鼠随机分为 2 组：对照 （CON） 组和模型 （MOD） 组，前者不会暴露于隔离或压力下。每组包含12只大鼠。
   2. 将大鼠饲养在尺寸为55 cm x 40 cm x 20 cm的标准笼中，每个笼子6只大鼠。除非另有说明，否则在整个适应期间保留笼子分配。
   3. 用新鲜的垫料填充每个育种笼，每周更换两次。
   4. 进行为期 1 周的适应期。让大鼠不受限制地获取食物和水，除非在CUMS压力源应用期间。除非另有说明，否则保持恒定的环境，温度为 22°C ± 2°C，湿度为 55% ± 15%，从 08：00 到 20：00 为 12 小时的光/暗循环。
   5. 在开始实验之前，每天处理大鼠，使它们适应研究人员，并尽量减少实验阶....

讨论

抑郁症是一种精神障碍，其特征是情绪低落、缺乏快乐和精力减少等症状³⁰.在抑郁症研究领域，建立可靠的动物模型对于推进治疗干预至关重要。在各种动物模型中，CUMS模型因其高信度、效度以及与人类抑郁症³¹特征的一致性而特别值得关注。它非常适合在各种环境中模拟低水平压力源在长时间内的累积效应。在这项研究中，我们采用了步骤 1.2.3 和表 2

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL centrifuge tube	service Biotechnology Co., Ltd	EP-150-M
1000 µL Pipette	service Biotechnology Co., Ltd	IC021198160223
10 µL pipette tip	service Biotechnology Co., Ltd	IC012395160823
10 µL pipette tip	service Biotechnology Co., Ltd	TP-10
1250 µL pipette tip	service Biotechnology Co., Ltd	TP-1250
2 mL centrifuge tube	service Biotechnology Co., Ltd	EP-200-M
200 µL pipette tip	service Biotechnology Co., Ltd	TP-200
200 µL pipette tip	service Biotechnology Co., Ltd	IC021029160323
300 µL Multi-Channel Pipette	service Biotechnology Co., Ltd	IC091006161022
50 µL Pipette	service Biotechnology Co., Ltd	DS35110
Automatic plate washing machine	rayto Life Sciences Co., Ltd	RT-3100
Benchtop High-Speed Freezing Centrifuge	dalong construction Co., Ltd	D3024R
electronic balance	Mettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., Ltd	ME203E/02
Electrothermal blast drying oven	Labotery Experimental Instrument Equipment Co., Ltd	GEL-70
Enzyme Label Detector	BioTeK Co., Ltd	Epoch
High Speed Tissue Grinder	service Biotechnology Co., Ltd	KZ--F
Horizontal Freezer	Mellow Group Co., Ltd	BCD-318AT
Laboratory Ultrapure Water Machine	Jinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd	AK-RO-C2
Morris water maze video trail analysing system	Tai Meng Tech Co., Ltd	WMT-200
Rat 5-HT ELISA Kit	Lian Ke bio Co., Ltd,China	96T/48T
SPF grade Sprague Dawley (SD) rats	SPF (Beijing) Biotechnology Co	SCXK(JING)2019-0010
Sprague Dawley rats	Beijing Biotechnology Co., Ltd, China	SCXK (JING) 2019-0010
Vertical Refrigerated Display Cabinet	Xingx Group Co., Ltd	LSC-316C
video tracking system	Tai Meng Tech Co., Ltd	ZH-ZFT
vortex mixer	Servicebio technology Co., Ltd	MV-100