Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מתאר מודל לחץ קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) לדיכאון המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית, יחד עם שיטות לאימות מבחנים התנהגותיים.

Abstract

דיכאון הוא הפרעה רגשית נפוצה ומהווה גורם מוביל לנכות עולמית. מגבלות ההתערבויות הפרמקולוגיות הנוכחיות תורמות לנטל הבריאותי המשמעותי המיוחס למצב זה. יש צורך דחוף בהבנה עמוקה יותר של המנגנונים הבסיסיים של דיכאון, מה שהופך מודלים פרה-קליניים עם פוטנציאל תרגומי בעלי ערך רב. הרפואה המונגולית, תת-קבוצה של הרפואה המסורתית, מניחה כי הופעת מחלות קשורה קשר הדוק לשיווי המשקל של רוח, מרה וליחה. במחקר זה אנו מציגים פרוטוקול לשיטת העקה הקלה הכרונית הבלתי צפויה (CUMS) בחולדות. במסגרת זו, חולדות חשופות לסדרה של גורמי עקה משתנים וקלים כדי לגרום לפנוטיפ דמוי דיכאון, המחקה את הפתוגנזה של דיכאון אנושי. בדיקות התנהגותיות המשמשות בפרוטוקול זה כוללות את מבחן העדפת סוכרוז (SPT), המעיד על אנהדוניה - תסמין ליבה של דיכאון; מבחן השדה הפתוח (OFT), המודד את רמות החרדה; ומבחן מבוך המים מוריס (MWM), המעריך זיכרון מרחבי ויכולות למידה. שיטת CUMS מדגימה את היכולת לגרום לאנהדוניה ולגרום לליקויים התנהגותיים ארוכי טווח. יתר על כן, פרוטוקול זה תואם יותר את התיאוריה הרפואית המונגולית מאשר מודלים אחרים של בעלי חיים שנועדו לעורר התנהגות דמוית דיכאון. פיתוח מודל זה של בעלי חיים והמחקר שבעקבותיו מספקים בסיס איתן למחקרים חדשניים עתידיים בתחום הרפואה המונגולית.

Introduction

הפרעת דיכאון מג'ורי (MDD) היא מחלת נפש נפוצה, המדורגת כגורם השלישי המוביל לנכות ברחבי העולם ומשפיעה על יותר מ -300 מיליון אנשים1,2,3. יש לציין כי ההערכה היא כי לפחות מחצית מהאנשים שנפגעו אינם מקבלים טיפול הולם4. בהינתן פער זה, מודלים של בעלי חיים משמשים כלי מכריע לחקר האטיולוגיה של דיכאון. נכון להיום, קיימים יותר מ -20 מודלים שונים של בעלי חיים לדיכאון5. מבין אלה, מודל הלחץ המתון הכרוני הבלתי צפוי (CUMS), ששוכלל על ידי פול וינר בשנת 1987, הוא הנפוץ ביותר6. מודל CUMS פועל על בסיס ההנחה שחשיפת מכרסמים למגוון רחב של גורמי עקה חברתיים-סביבתיים מובילה לתסמינים הדומים לחרדה, מתח ודיכאון. המתודולוגיה כוללת חשיפת בעלי חיים לגורמי עקה קלים שונים במשך מספר שבועות, ששיאם במגוון שינויים התנהגותיים, כולל אנהדוניה והתנהגויות דיכאוניות7,8. שינויים אלה מלווים בשינויים בפרופילים האנדוקריניים והנוירוטרנסמיטרים, כגון ירידה ב-5-HT9,10. תוצאות אלה דומות מאוד לאלה שנצפו בבני אדם שאובחנו עם MDD, ובכך מאמתות את התועלת של המודל. מודל CUMS מוערך במיוחד בשל יעילותו בהערכת תרופות נוגדות דיכאון, המבטאות רמות גבוהות של תקפות פני השטח, המבנה והחיזוי11,12. שלא כמו מודלים אחרים, CUMS רגיש להשפעות של ניהול כרוני של תרופות נוגדות דיכאון מונואמינרגיות. לדוגמה, מעכבי ספיגה חוזרת של סרוטונין סלקטיביים (SSRI) כגון citalopram, paroxetine ו- fluoxetine הוכחו כמונעים והופכים אנהדוניה בתנאים של לחץ כרוני12,13. בנוסף, תרופות נוגדות דיכאון מהירות פעולה חדשות, כגון קטמין, הוכיחו יעילות גם במודל זה14,15. לעומת זאת, מבחנים אחרים כמו מבחן השחייה הכפויה (FST) ומבחן מתלה הזנב (TST) הם פחות אמינים למידול שינויים התנהגותיים ארוכי טווח, ולעתים קרובות משקפים הסתגלות ללחץ אקוטי ולא סימפטומים מתמשכים של דיכאון16. מאפיינים אלה מדגישים את התוקף האיתן של מודל CUMS במחקר דיכאון. אחד המאפיינים הבולטים ביותר של מודל CUMS, המוכר באמינותו הגבוהה בלימודים קלאסיים, הוא anhedonia - חוסר היכולת לחוות הנאה או עניין בפעילויות יומיומיות17,18. תופעה זו מוערכת בדרך כלל באמצעות בדיקות העדפת סוכרוז, ותרופות נוגדות דיכאון רבות הוכחו כמחזירות את צריכת הסוכרוז המופחתת. מספר מדדים אחרים משמשים בדרך כלל גם בספרות CUMS, כולל מבחן שדה פתוח (OFT), אשר מעריך התנהגות מוטורית רצונית, נטיות גישוש, ומתח, ובכך מודד את חומרת הדיכאון19. מבחנים אחרים כגון מבוך פלוס מוגבה (EPM) מעריכים התנהגויות דמויות חרדה, מבחן מבוך המים מוריס (MWM) בוחן תפקוד קוגניטיבי20וה- FST מעריך רגישות לרגשות שליליים וייאוש התנהגותי.,20. יתר על כן, רוב גורמי הלחץ המשפיעים על בני אדם הם חברתיים מטבעם. אנשים עם קשרים חברתיים לא אופטימליים, המאופיינים בפעילויות חברתיות מוגבלות, רשתות ותמיכה, נמצאים בסיכון מוגבר למחלות שונות21,22. זה רלוונטי גם במקרה של מכרסמים, שהם בעלי חיים חברתיים החיים בקבוצות. לדוגמה, חולדות השוכנות בבידוד מציגות מאפיינים של מה שמכונה תסמונת בידוד, הגורמת ללחץ חברתי ומזרזת את הופעת הדיכאון23.

הרפואה המונגולית, ענף משמעותי של הרפואה הסינית, מניחה כי הופעת המחלה היא יחסי גומלין מורכבים בין גורמים פנימיים וחיצוניים. גורמים חיצוניים אלה, המכונים ארבעת תנאי העזר, כוללים שינויי אקלים, תזונה, אורח חיים ואירועים פתאומיים כגון זיהומים, אירועים מבהילים והפרעות פסיכולוגיות. תהליך המחלה מושג כאינטראקציה מתמשכת בין שלושה יסודות - המכונים שלושת סוגי ההומורים - לבין שבעת מרכיבי הגוף בתיאום עם ארבעת תנאי העזר24 . הרפואה המונגולית גורסת כי גוף האדם מתפקד כישות משולבת, הנשמרת על ידי איזון יחסי בין שלושת ההומורים. הפרעה באיזון זה נחשבת כמבשרת מחלה24 . בהתחשב בתפקיד המרכזי של ניסויים בבעלי חיים בגישור בין רפואה מסורתית למודרנית, חיוני לפתח מודלים של בעלי חיים הרלוונטיים למחקר בתחום הרפואה המונגולית. בהתאם לכך, השתמשנו במתודולוגיית בידוד של 28 יום יחד עם CUMS כדי לדמות גורמי לחץ פיזיולוגיים ופסיכולוגיים אלה. בחרנו תשעה גורמי לחץ בלתי צפויים ספציפיים וביקשנו לבסס את שיטת המידול הזו באמצעות תיאוריית שלושת ההומורים של הרפואה המונגולית. ביסוס מודל חזק של בעלי חיים הוא יסוד לקידום המחקר הבסיסי ברפואה המונגולית ויתרום משמעותית למחקרי היסוד שלו.

Protocol

פרוטוקולי הניסוי קיבלו אישור מהוועדה לטיפול באתיקה של ניסויים בבעלי חיים באוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית (YKD202301172) ועמדו בהנחיות המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ואתיקה בבעלי חיים. מספר הרישוי של מרכז בעלי החיים שלנו הוא NO.110324230102364187. עשרים וארבע חולדות ספראג-דולי (SD) זכרים, כל אחת בת 8 שבועות (200 גרם ±-20 גרם), נרכשו ושוכנו בסביבה מבוקרת עם טמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ±-2 מעלות צלזיוס ולחות של 55% ±-15%. האכילו את החולדות בתזונה של תחזוקת מכרסמים ומים טהורים בקלחי תירס למצעים. החולדות היו נתונות למחזור אור/חושך של 12 שעות/12 שעות במשך שבוע לפני הניסויים.

1. הקמת מודל חולדות CUMS

  1. קיבוץ
    1. חלקו את 24 החולדות באופן אקראי לשתי קבוצות: קבוצת הביקורת (CON), שלא תהיה חשופה לבידוד או ללחץ, וקבוצת המודל (MOD). כל קבוצה מכילה 12 חולדות.
    2. מאכלסים את החולדות בכלובים סטנדרטיים בגודל 55X40X20 ס"מ, עם 6 חולדות בכל כלוב. יש לשמור על הקצאת הכלוב לאורך כל תקופת ההתאקלמות, אלא אם צוין אחרת.
    3. מלאו כל כלוב גידול במצעים רעננים והחליפו אותו פעמיים בשבוע.
    4. יש לבצע תקופת התאקלמות של שבוע. אפשרו לחולדות גישה בלתי מוגבלת למזון ומים, למעט במהלך הפעלת לחץ CUMS. יש לשמור על סביבה קבועה עם טמפרטורה של 22°C ±-2°C, לחות של 55% ±-15%, ומחזור אור/חושך של 12 שעות/12 שעות בין השעות 08:00 ל-20:00, אלא אם צוין אחרת.
    5. לפני תחילת הניסוי, טפלו בחולדות מדי יום כדי להרגיל אותן בפני החוקר ולמזער עקה נוספת במהלך שלב הניסוי.
  2. בידוד עם מתח קל כרוני בלתי צפוי
    1. במקביל, מקם את קבוצות MOD ו- CON בחדרים נפרדים. בית חולדות קבוצת MOD בנפרד, תוך שמירה על חולדות קבוצת CON יחד. שמור על כל התנאים האחרים קבועים.
    2. יישמו משטר לחצים של 28 יום25. כדי למנוע התרגלות ולהבטיח לחץ בלתי צפוי, לנהל גורם לחץ אקראי אחד ביום, הימנעות משימוש באותו גורם לחץ בימים רצופים.
    3. יש להפעיל באופן אקראי אחד מתשעת גורמי הלחץ הבאים 26,27 בימים שונים: מניעת מים למשך 24 שעות, מניעת מזון למשך 24 שעות, ריפוד רטוב, שיפוע הכלוב, היפוך מחזור האור/חושך, חשיפה לקור ב-4°C, חשיפה לחום ב-45°C, הידוק זנב למשך דקה אחת או טלטול של 15 דקות ב-160 סל"ד. העיצוב הספציפי מתואר בטבלה 1.
    4. במהלך הפעלת גורם הדחק, יש להגביל את הגישה למזון ומים לקבוצת MOD עד לסיום הלחץ, למעט במהלך היפוך מחזור האור/חושך. קבוצת CON לא נדרשה להגביל מים ודיאטה.
  3. שיטות לחץ
    1. התחל את הניסוי על ידי הפעלת גירויי דיכאון בשילוב עם בידוד של 28 יום לכל החולדות, למעט קבוצת הביקורת. אכסנו את החולדות האלה בכלובים נפרדים. עיין בטבלה 2 עבור מצבים הקשורים לגירויי דיכאון.
    2. כדי לבצע את שיטת מהדק הזנב, אבטחו זנב של חולדה מקבוצת MOD על ידי הידוק הזנב עם אטב נייר סטנדרטי במרחק של 1-2 ס"מ משורש זנב החולדה. מדוד את זמן ההידוק למשך דקה אחת (n = 12).
    3. בשיטת המחסור במים, יש למנוע מים מחולדה מקבוצת MOD על ידי הוצאת בקבוק המים שלה ולהקליט במשך 24 שעות.
      הערה: שעת תחילת המחסור במים נרשמה כך שניתן היה לחשב במדויק את שעת הסיום; נצפתה התנהגות החולדות בתקופה זו, כולל פעילות, תיאבון ומצב נפשי.
    4. בשיטת מניעת מזון, יש למנוע מזון מחולדה מקבוצת MOD ולרשום במשך 24 שעות.
      הערה: רשום את הזמן שבו מתחיל מחסור במזון כדי שניתן יהיה לחשב במדויק את שעת הסיום; להבטיח כי חולדות הם hydrated כראוי בתקופה זו; ולהתבונן בהתנהגות החולדות בתקופה זו, כולל פעילות ומצב נפשי וכו'.
    5. לגירוי קר ב 4 מעלות צלזיוס, הניחו חולדה מקבוצת MOD בדלי מים קרים והקליטו במשך 5 דקות. יש לוודא שטמפרטורת המים נשארת עקבית לאורך כל הבדיקה. בסיום הניסוי, יבשו את החולדה עם מפוח והחזירו אותה לכלוב המקורי שלה.
      הערה: שמור על טמפרטורת המים הקרים ב -4 °C באמצעות מדחום וקוביות קרח כדי לווסת את טמפרטורת המים כאשר היא עולה. יש להחליף את המים באופן קבוע כדי להבטיח שאיכות המים נקייה והטמפרטורה קבועה. בעת שחייה, כל הגפיים והגזעים של החולדות צריכים להיות שקועים במים קרים למעט הראש. עומק המים חייב להיות גדול מאורך גוף החולדה כדי למנוע מהחולדה לקפוץ מהמים עקב מגע עם תחתית הדלי.
    6. כדי לנהל עקת חום של 45 מעלות צלזיוס, הניחו חולדה מקבוצת MOD באינקובטור והקליטו במשך 5 דקות, כדי להבטיח שהטמפרטורה תישאר יציבה לאורך כל הבדיקה.
    7. בהיפוך מחזור האור-חושך, עטפו את הכלוב בבד שחור למשך שעה אחת כדי לדמות חושך בשעות היום. לאחר מכן, האר את הכלוב למשך 12 שעות במהלך הלילה כדי לחקות את אור היום. רשמו את התנהגות החולדה, צריכת המזון והמים ודפוסי השינה שלה במשך 24 שעות.
    8. לניסוי הריפוד הרטוב, הכניסו 200 מ"ל מים לכלוב המכיל 100 גרם ריפוד. משכן חולדה מקבוצת MOD בכלוב הרטוב ומתעד את התנהגות החולדות תחת לחץ מצעים רטוב, כולל פעילות, תיאבון, צריכת מים וכו'. שימו לב אם יש התנהגויות חריגות או תגובות לא נוחות, כגון מצב העור והשיער של החולדות, שעלולות להיגרם על ידי הריפוד הרטוב, ותיעדו אותן בזמן לניתוח הבא במשך 24 שעות. לאחר הבדיקה יבשו את החולדה עם מפוח והחזירו אותה לכלוב עם שבבי עץ טריים.
    9. בשיטת שיפוע הכלוב, מקמו חולדה מקבוצת MOD בכלוב המוטה בזווית של 45 מעלות כנגד קיר ותיעדו במשך 24 שעות. השתמש במבנה מסגרת הכלוב כדי להתאים את הזווית ולאבטח את הכלוב במקומו.
      הערה: חשב את הזמן מתחילתו ועד סופו והתבונן בהתנהגות החולדות במהלך תקופת הטיית הכלוב, כולל פעילות, תיאבון ומצב נפשי, וודא שזווית הכלוב המוטה מוגדרת כראוי ונשארת יציבה כדי להבטיח את הדיוק והשחזור של הניסוי.
    10. לניעור במהירות גבוהה, הניחו חולדה מקבוצת MOD בשייקר מכני המכוון ל-160 סל"ד ותיעדו את החולדה למשך 15 דקות. שיטות בדיקה התנהגותיות משמשות לאחר מכן כדי להעריך את ההקמה המוצלחת של המודל.
    11. לאחר הפעלת גורמי לחץ, העבירו את הכלובים הקבוצתיים של משרד הביטחון מחדר ה-CUMS בחזרה לחדר הדיור. במהלך תקופת החשיפה לסטרס של 4 שבועות, שמרו על קבוצת CON בכלובים הביתיים שלהם הממוקמים בחדר הדיור.
  4. אמצעי זהירות במהלך ניסויים
    1. העברת כלובי קבוצת משרד הביטחון חזרה לחדר הדיור הכללי לאחר הפעלת גורם הלחץ בחדר ה- CUMS.
    2. ניטור בעלי חיים במהלך מידול CUMS
      1. במהלך הידוק הזנב, בעל החיים צפוי להיאבק בשל הגירוי המושרה. במהלך תקופה זו, ברציפות לפקח על המהדק. אם הוא מתנתק, השהה את הטיימר, הפעל מחדש את המהדק ולאחר מכן חדש את הטיימר למשך דקה.
      2. אין להטיל מניעת מים ולחצים על מצעים רטובים בו זמנית.
        הערה: הימנעות מכפייה בו זמנית של ריפוד רטוב ומניעת מים מסייעת לשמור על שלמות הניסוי, מפחיתה משתנים מבלבלים ומקדמת רווחת בעלי חיים.
      3. טמפרטורת הגוף של בעל החיים וטמפרטורת החדר עשויים להעלות את טמפרטורת המים במהלך שחייה במים קרים. לכן, התאימו על ידי הוספת מי קרח או קוביות קרח כדי לשמור על טמפרטורת מים קבועה.
      4. התבוננו בחולדות במרווחים של 30 דקות במהלך הפעלת גורמי סטרס, למעט במהלך היפוך יומי. שימו לב במיוחד לסימנים של מצוקה חריגה, כגון רעד, עייפות או חוסר תנועה. אם נצפים תסמינים כאלה - במיוחד היפותרמיה פוטנציאלית במהלך 4 מעלות צלזיוס, שחייה במים קרים ומצעים רטובים - הסר מיד את החולדה מגורם הלחץ.
        הערה: הסר את חיות הניסוי מהמחקר כאשר יש להן בעיות בריאותיות, כגון זיהום, טראומה חמורה, התנהגויות תוקפניות, ניידות לא תקינה וכו ', התנאים להוצאת בעלי החיים מהמחקר סובבים בדרך כלל סביב הגנה על בריאותם ובטיחותם תוך הבטחת שלמות תוצאות הניסוי.
      5. ערכו בדיקות יומיות לאיתור פצעים או הפרעות פיזיות או התנהגותיות אחרות בכל חולדה. אם נצפות חריגות כלשהן, התייעצו עם וטרינר המעבדה כדי לקבוע אם יש להוציא את החולדה מהניסוי.
      6. שוקלים כל חולדה כל 3 ימים. אם בעל חיים מאבד יותר מ -20% ממשקל גופו הבסיסי לפני ההאכלה, יש להוציא אותו מהניסוי.

2. מבחנים התנהגותיים

  1. כדי להתחיל, לתת את גירויי דיכאון בשילוב עם בידוד במשך 28 ימים לכל החולדות, למעט קבוצת הביקורת. אכסנו את החולדות בכלובים נפרדים. עיין בטבלה 2 לקבלת פרטים על מצבי גירויי דיכאון.
  2. עבור בדיקת השדה הפתוח, חלק קופסה שחורה ל- 25 מקטעים מרובעים בעלי שטח שווה. התקן מערכת ניתוח מעקב וידאו בתיבה. הניחו את החולדה בריבוע המרכזי ועקבו אחר פעילותה האופקית והאנכית למשך 5 דקות.
    הערה: מידות התיבה הן 500 מ"מ x 500 מ"מ x 300 מ"מ. נתוני הפעילות ייאספו באמצעות מערכת מעקב הווידאו כדי להעריך התנהגויות הקשורות לחרדה אצל מכרסמים כאשר הם נחשפים לסביבה חדשה.
  3. לאחר מכן, ספרו את מספר הריבועים שהחולדה חצתה, תוך שימוש בכל הכפות, כדי לכמת את הפעילות האופקית. ספור מופעים של עמידה וטיפוח כאינדיקטורים לפעילות אנכית. לאחר כל בדיקה, יש לחטא את הקופסה באמצעות 75% אלכוהול כדי לסלק שאריות ריחות של חולדות בבדיקות הבאות.
  4. לאחר מכן, anhedonia מוערך באמצעות מבחן העדפת סוכרוז. הניחו שני בקבוקים על מכסה הכלוב: בקבוק A מכיל מים טהורים, ואילו בקבוק B מכיל תמיסת סוכרוז 1%. אפשר גישה לשני הפתרונות עבור החולדה. שקלו את הבקבוקים לפני ואחרי הצריכה כדי לחשב את שיעורי העדפת סוכרוז של 60 דקות בימים 0, 7, 14, 21 ו-28. הנוסחה היא כדלקמן:
    צריכת סוכרוז = figure-protocol-8377 × 100%
  5. כדי למדוד זיכרון מרחבי ויכולות למידה, השתמשו במבחן מבוך המים מוריס. חלקו את הבריכה לארבעה רבעים, וספרו אותם מאחד עד ארבעה. הניחו ברביע השלישי משטח מנוחה שקוע 1 ס"מ מתחת לפני המים.
  6. הכניסו חלב לבריכה כדי להגביר את אטימות המים ולשמור על טמפרטורת מים של כ -23 מעלות צלזיוס לאורך כל הליך הניסוי.
  7. מקמו כל חולדה ברבעים שונים של המבוך, ואפשרו להם 120 שניות לאתר את הפלטפורמה הנסתרת. החולדות צריכות להסתמך על זיכרון מרחבי ומיומנויות למידה כדי לזכור את מיקום הרציף. ברגע שהם לומדים את מיקום הרציף, הם יכולים לשחות ישירות אליו. הקלט את זמן ההשהיה באמצעות מערכת מעקב הווידאו של מבוך המים מוריס.
  8. מקמו את החולדה במקום קבוע בבריכה. אם הנושא אינו מצליח לאתר את הפלטפורמה המוסתרת בתוך 120 שניות, רשום את ההשהיה כ- 120 שניות.
  9. לבסוף, הסירו את הפלטפורמה הנסתרת, החזירו את החולדה למים, ותיעדו את מספר מעברי האזור במשך תקופה של 120 שניות.

3. ניתוח סטטיסטי

  1. כדי להעריך הבדלים משמעותיים בפרמטרים ביוכימיים, השתמש בניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן פוסט-הוק של דאנקן. הצג את הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן (SE) והתייחס לערך p של פחות מ- 0.05 כמובהק סטטיסטית.

תוצאות

תוצאות המבחנים ההתנהגותיים במודל דיכאון חולדות הנגרם על ידי CUMS
כדי לאשש את היעילות של הליך CUMS לגרימת התנהגויות דמויות דיכאון, בוצעה בדיקת מניפולציה. חולדות Sprague-Dawley (SD) זכרים הוקצו באופן אקראי לקבוצת MOD או CON לתקופה של 4 שבועות, כמתואר בשלב 1.2.3. לאחר מכן, החולדות הוקרבו, וההיפוקמפוס...

Discussion

דיכאון הוא הפרעה נפשית המאופיינת בתסמינים כגון מצב רוח ירוד, חוסר הנאה ואנרגיה מופחתת30. בתחום חקר הדיכאון, ביסוס מודל אמין של בעלי חיים הוא חיוני לקידום התערבויות טיפוליות. בין מודלים שונים של בעלי חיים, מודל CUMS ראוי לציון במיוחד בשל אמינותו הגבוהה, תוקפו, וחפיפתו למאפייני הדי...

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

Acknowledgements

אנו אסירי תודה על המכשור והמעבדה שסופקו על ידיהרחבת תודתנו לפקולטה לרפואה מונגולית של האוניברסיטה הרפואית המונגולית הפנימית, סין.מחקר זה נתמך על ידי, על מתן המכשור הדרוש ומתקני מעבדה. מחקר זה קיבל תמיכה כספית מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '81760762) ומפרויקט האוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית של סין (מענק מס '. YKD2022MS074), ופרויקט המחקר המדעי להשכלה גבוהה במונגוליה הפנימית, סין (מענק מס' NJZY22661) ופרויקט הקרן הפתוחה של מעבדת מפתח לרפואה סינית ומונגולית באזור האוטונומי מונגוליה הפנימית, סין (מענק מס. MYX2023-K07).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL centrifuge tubeservice Biotechnology Co., LtdEP-150-M
1000 µL Pipetteservice Biotechnology Co., LtdIC021198160223
10 µL pipette tipservice Biotechnology Co., LtdIC012395160823
10 µL pipette tipservice Biotechnology Co., LtdTP-10
1250 µL pipette tipservice Biotechnology Co., LtdTP-1250
2 mL centrifuge tubeservice Biotechnology Co., LtdEP-200-M
200 µL pipette tipservice Biotechnology Co., LtdTP-200
200 µL pipette tipservice Biotechnology Co., LtdIC021029160323
300 µL Multi-Channel Pipetteservice Biotechnology Co., LtdIC091006161022
50 µL Pipetteservice Biotechnology Co., LtdDS35110
Automatic plate washing machinerayto Life Sciences Co., LtdRT-3100
Benchtop High-Speed Freezing Centrifugedalong construction Co., LtdD3024R
electronic balanceMettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., LtdME203E/02
Electrothermal blast drying ovenLabotery Experimental Instrument Equipment Co., LtdGEL-70
Enzyme Label DetectorBioTeK Co., LtdEpoch
High Speed Tissue Grinderservice Biotechnology Co., LtdKZ-figure-materials-2178-F
Horizontal FreezerMellow Group Co., LtdBCD-318AT
Laboratory Ultrapure Water MachineJinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd  AK-RO-C2
Morris water maze video trail analysing system Tai Meng Tech Co., LtdWMT-200
Rat 5-HT ELISA KitLian Ke bio Co., Ltd,China96T/48T
SPF grade Sprague Dawley (SD) ratsSPF (Beijing) Biotechnology Co SCXK(JING)2019-0010
Sprague Dawley ratsBeijing Biotechnology Co., Ltd, China SCXK (JING) 2019-0010
Vertical Refrigerated Display CabinetXingx Group Co., LtdLSC-316C
video tracking systemTai Meng Tech Co., LtdZH-ZFT
vortex mixerServicebio technology Co., LtdMV-100

References

  1. Alqurashi, G. K., et al. The impact of chronic unpredictable mild stress-induced depression on spatial, recognition and reference memory tasks in mice: Behavioral and histological study. Behav Sci. 12 (6), 166 (2022).
  2. Yu, S., Wang, L., Jing, X., Wang, Y., An, C. Features of gut microbiota and short-chain fatty acids in patients with first-episode depression and their relationship with the clinical symptoms. Front Psychol. 14, 1088268 (2023).
  3. Duda, P., Hajka, D., Wójcicka, O., Rakus, D., Gizak, A. Gsk3β: A master player in depressive disorder pathogenesis and treatment responsiveness. Cells. 9 (3), 727 (2020).
  4. Correia, A. S., Vale, N. Tryptophan metabolism in depression: A narrative review with a focus on serotonin and kynurenine pathways. Int J Mol Sci. 23 (15), 8493 (2022).
  5. Hao, Y., Ge, H., Sun, M., Gao, Y. Selecting an appropriate animal model of depression. Int J Mol Sci. 20 (19), 4827 (2019).
  6. Willner, P., Towell, A., Sampson, D., Sophokleous, S., Muscat, R. Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress, and its restoration by a tricyclic antidepressant. Psychopharmacology (Berl). 93 (3), 358-364 (1987).
  7. Nakase, S., Kitayama, I., Soya, H., Hamanaka, K., Nomura, J. Increased expression of magnocellular arginine vasopressin mrna in paraventricular nucleus of stress-induced depression-model rats. Life Sci. 63 (1), 23-31 (1998).
  8. Wu, X., et al. Involvement of kynurenine pathway between inflammation and glutamate in the underlying etiopathology of cums-induced depression mouse model. BMC Neurosci. 23 (1), 62 (2022).
  9. Zhang, C., et al. Minocycline ameliorates depressive behaviors and neuro-immune dysfunction induced by chronic unpredictable mild stress in the rat. Behav Brain Res. 356, 348-357 (2019).
  10. Ma, J., Wang, R., Chen, Y., Wang, Z., Dong, Y. 5-HT attenuates chronic stress-induced cognitive impairment in mice through intestinal flora disruption. J Neuroinflammation. 20 (1), 23 (2023).
  11. Nollet, M. Models of depression: Unpredictable chronic mild stress in mice. Curr Protoc. 1 (8), e208 (2021).
  12. Becker, M., Pinhasov, A., Ornoy, A. Animal models of depression: What can they teach us about the human disease. Diagnostics (Basel). 11 (1), 123 (2021).
  13. Petkovic, A., Chaudhury, D. Encore: Behavioural animal models of stress, depression and mood disorders. Front Behav Neurosci. 16, 931964 (2022).
  14. Okine, T., Shepard, R., Lemanski, E., Coutellier, L. Sex differences in the sustained effects of ketamine on resilience to chronic stress. Front Behav Neurosci. 14, 581360 (2020).
  15. Fitzgerald, P. J., et al. Sex- and stress-dependent effects of a single injection of ketamine on open field and forced swim behavior. Stress. 24 (6), 857-865 (2021).
  16. Doron, R., Burstein, O. The unpredictable chronic mild stress protocol for inducing anhedonia in mice. J Vis Exp. (140), e58184 (2018).
  17. De Vry, J., Schreiber, R. The chronic mild stress depression model: Future developments from a drug discovery perspective. Psychopharmacology (Berl). 134 (4), 349-350 (1997).
  18. Tong, J., et al. Antidepressant effect of helicid in chronic unpredictable mild stress model in rats. Int Immunopharmacol. 67, 13-21 (2019).
  19. Liu, H., et al. Tnf signaling pathway-mediated microglial activation in the pfc underlies acute paradoxical sleep deprivation-induced anxiety-like behaviors in mice. Brain Behav Immun. 100, 254-266 (2022).
  20. He, L. W., et al. Optimization of food deprivation and sucrose preference test in sd rat model undergoing chronic unpredictable mild stress. Animal Model Exp Med. 3 (1), 69-78 (2020).
  21. Ma, W., Wu, B., Gao, X., Zhong, R. Association between frailty and cognitive function in older chinese people: A moderated mediation of social relationships and depressive symptoms. J Affect Disord. 316, 223-232 (2022).
  22. Geng, C., et al. Systematic impacts of chronic unpredictable mild stress on metabolomics in rats. Sci Rep. 10 (1), 700 (2020).
  23. Holmes, T. H., Rahe, R. H. The social readjustment rating scale. J Psychosom Res. 11 (2), 213-218 (1967).
  24. Zhang, M., et al. Shuxie-1 decoction alleviated cums -induced liver injury via il-6/jak2/stat3 signaling. Front Pharmacol. 13, 848355 (2022).
  25. Antoniuk, S., Bijata, M., Ponimaskin, E., Wlodarczyk, J. Chronic unpredictable mild stress for modeling depression in rodents: Meta-analysis of model reliability. Neurosci Biobehav Rev. 99, 101-116 (2019).
  26. Hu, C., et al. Re-evaluation of the interrelationships among the behavioral tests in rats exposed to chronic unpredictable mild stress. PLoS One. 12 (9), e0185129 (2017).
  27. Li, Y., et al. Increased hippocampal fissure width is a sensitive indicator of rat hippocampal atrophy. Brain Res Bull. 137, 91-97 (2018).
  28. Hu, R. L. B. G., et al. Effects of the Mongolian medicine Zadi-5 on monoamine neurotransmitters in the brain of rats with chronic stress depression model. Info Traditional Chinese Med. 34 (06), 5-8 (2017).
  29. Zhou, Y., Cong, Y., Liu, H. Folic acid ameliorates depression-like behaviour in a rat model of chronic unpredictable mild stress. BMC Neurosci. 21 (1), 1 (2020).
  30. Zhuang, Y., Zeng, R., Liu, X., Yang, L., Chan, Z. Neoagaro-oligosaccharides ameliorate chronic restraint stress-induced depression by increasing 5-ht and bdnf in the brain and remodeling the gut microbiota of mice. Mar Drugs. 20 (11), 725 (2022).
  31. Socała, K., et al. The role of microbiota-gut-brain axis in neuropsychiatric and neurological disorders. Pharmacol Res. 172, 105840 (2021).
  32. Song, J., Kim, Y. K. Animal models for the study of depressive disorder. CNS Neurosci Ther. 27 (6), 633-642 (2021).
  33. Abelaira, H. M., Réus, G. Z., Quevedo, J. Animal models as tools to study the pathophysiology of depression. Braz J Psychiatry. 35 Suppl 2, S112-S120 (2013).
  34. Strekalova, T., et al. Chronic mild stress paradigm as a rat model of depression: Facts, artifacts, and future perspectives. Psychopharmacology (Berl). 239 (3), 663-693 (2022).
  35. Markov, D. D. Sucrose preference test as a measure of anhedonic behavior in a chronic unpredictable mild stress model of depression: Outstanding issues. Brain Sci. 12 (10), 1287 (2022).
  36. Czéh, B., Fuchs, E., Wiborg, O., Simon, M. Animal models of major depression and their clinical implications. Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 64, 293-310 (2016).
  37. Gururajan, A., Reif, A., Cryan, J. F., Slattery, D. A. The future of rodent models in depression research. Nat Rev Neurosci. 20 (11), 686-701 (2019).
  38. Markov, D. D., Novosadova, E. V. Chronic unpredictable mild stress model of depression: Possible sources of poor reproducibility and latent variables. Biology (Basel). 11 (11), 1621 (2022).
  39. Willner, P. The chronic mild stress (cms) model of depression: History, evaluation and usage. Neurobiol Stress. 6, 78-93 (2017).
  40. Lages, Y. V. M., Rossi, A. D., Krahe, T. E., Landeira-Fernandez, J. Effect of chronic unpredictable mild stress on the expression profile of serotonin receptors in rats and mice: A meta-analysis. Neurosci Biobehav Rev. 124, 78-88 (2021).
  41. Willner, P., et al. Validation of chronic mild stress in the wistar-kyoto rat as an animal model of treatment-resistant depression. Behavioural Pharmacology. 30 (2 and 3), 239-250 (2019).
  42. Slattery, D. A., Cryan, J. F. Modelling depression in animals: At the interface of reward and stress pathways. Psychopharmacology (Berl). 234 (9-10), 1451-1465 (2017).
  43. Sterley, T. L., et al. Social transmission and buffering of synaptic changes after stress. Nat Neurosci. 21 (3), 393-403 (2018).
  44. Brechbühl, J., et al. Mouse alarm pheromone shares structural similarity with predator scents. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (12), 4762-4767 (2013).
  45. Beck, R. C., Self, J. L., Carter, D. J. Sucrose preference thresholds for satiated and water-deprived rats. Psychol Rep. 16, 901-905 (1965).
  46. Hawkins, P., Golledge, H. D. R. The 9 to 5 rodent - time for change? Scientific and animal welfare implications of circadian and light effects on laboratory mice and rats. J Neurosci Methods. 300, 20-25 (2018).
  47. Daut, R. A., Ravenel, J. R., Watkins, L. R., Maier, S. F., Fonken, L. K. The behavioral and neurochemical effects of an inescapable stressor are time of day dependent. Stress. 23 (4), 405-416 (2020).
  48. Hu, R. L. B. G., et al. Experimental research on nutmeg wuwei pills against of depression model rats behavior and hippocampus monoamine neurotransmitters. Chinese J Exp Traditional Medical Formulae. 21 (11), 146-149 (2015).
  49. Hu, R. L. B. G., et al. Effects of Rou kou Wuwei Pill on the learning and memory abilities and the expression of BDNF and TrkB in hippocampus of depression rats. Chinese J Traditional Chines Med Pro. 32 (8), 3797-3800 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

CUMSAnhedonia

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved