有意识大鼠的锁骨下静脉血液采样

摘要

在这里，我们介绍了有效的大鼠限制和锁骨下静脉穿刺方法的组合，可以在没有麻醉的情况下在大鼠中快速、安全和重复采血。

摘要

有几种既定的方法可以从大鼠身上获取重复的血液样本，最常用的方法是无麻醉的侧尾静脉取样和麻醉的颈静脉取样。然而，这些方法大多需要辅助和麻醉设备，有时在采血或血液样本质量差方面造成困难。此外，当需要对大量大鼠进行重复采血时，这些采血方法会消耗大量的时间和人力资源。本研究提出了一种由单个熟练个体对非麻醉大鼠进行重复采血的技术。通过刺穿锁骨下静脉可以获得非常令人满意的血液样本。该方法显示出令人印象深刻的 95% 的总体成功率，从大鼠约束到完成采血的中位时间仅为 2 分钟。此外，在指定范围内进行连续采血不会对大鼠造成任何伤害。这种方法值得推广用于血液采集，特别是在大规模的药代动力学研究中。

引言

大鼠是最常见的实验动物之一，获取血液样本的方法有很多种。对于在结束阶段涉及单次采血的实验，可以通过心脏穿刺或腹主动脉采血获得足够量的血液¹。然而，一些研究需要从大鼠身上重复采血以进行常规血液或生化分析，特别是在药代动力学和毒理学研究中，需要重复采血以确定药物的吸收、分布和代谢²。

目前，虽然尾静脉采血是大鼠采血最常见的方法，尽管不需要麻醉，但这种方法对于重复采集可能具有挑战性，并且采集的血液量相对较小^3,4。此外，虽然可以从隐静脉和静脉收集血液，但获得的血液量有限，并且需要麻醉^1,5。此外，从下颌下静脉丛以及舌下、颈静脉和锁骨下静脉采集的血液样本可提供更高质量的样本，但通常需要麻醉或多人的协助 1,6,7,8,9。最后，眶后窦/....

研究方案

本研究遵循了《实验动物护理和使用指南》第 8 版中概述的指南¹³。该研究获得了兰州大学第二医院伦理委员会的批准，并按照ARRIVE指南2.0¹⁴进行了记录。12-16周龄的12只健康Wistar大鼠（6只雄性体重290-330 g，6只雌性体重250-280 g）在兰州大学GLP动物实验室进行3天实际实验。使用的鼠笼为R5型，尺寸为545 mm x 395 mm x 200 mm，并配备了高压灭菌垫料。所有大鼠都可以不受限制地获得食物和水。实验室保持平均湿度为25%，平均温度为24°C，昼夜交替（上午7：00/晚上7：00）。在研究结束时，所有动物都使用过量的异氟烷被人道地安乐死。有关本研究中使用的材料和仪器的全面信息，请参阅 材料表。

1. 样本量计算和动物选择

1. 选择资源方程方法¹⁵ ，使用方程（1）估计动物样本量。
   E = 动物总数 − 组总数 （1）
   其中 E 是方差分析的自由度 （ANOVA），范围为 10 到 20。
   注意：在这项研究中，将12只动物分为 A 组和 B<....

讨论

虽然尾静脉采血是大鼠重复采血的最常见方法，但可能会受到麻醉药物的影响，并且由于尾静脉体积小，单次可采集的血液量有限，导致采血时间较长^4,5。尽管高效液相色谱 （HPLC） 串联质谱 （MS/MS） 系统与大鼠尾静脉的毛细管显微采样 （CMS） 相结合可以减少大鼠的血液使用量¹¹，但并非所有机构都配备了这种昂贵的设备。从球后丛.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum