意識のあるラットにおける鎖骨下静脈採血

要約

ここでは、麻酔なしでラットの迅速、安全、反復採血を可能にする効果的なラット制限法と鎖骨下静脈穿刺法の組み合わせを紹介します。

要約

ラットから繰り返し血液サンプルを取得するための確立された方法はいくつかあり、最も一般的に採用されている方法は、麻酔なしの側尾静脈サンプリングと麻酔による頸静脈サンプリングです。しかし、これらの方法のほとんどは、補助具や麻酔器具を必要とし、採血や血液サンプルの質の悪さという点で困難を伴うことがあります。さらに、これらの採血方法は、多数のラットに対して採血を繰り返す必要がある場合、多大な時間と人的資源を消費します。この研究は、麻酔をかけていないラットで、熟練した 1 人の個人で繰り返し採血する技術を提示します。鎖骨下静脈に穴を開けることで、非常に満足のいく血液サンプルを得ることができます。この方法は、ラットの拘束から採血完了までの時間の中央値で、95%という驚異的な全体的な成功率を示しました。また、指定範囲内で連続採血を行っても、ラットに害を及ぼすことはありません。この方法は、特に大規模な薬物動態研究において、採血のために推進する価値があります。

概要

ラットは最も一般的な実験動物の1つであり、血液サンプルを取得する方法はたくさんあります。最終段階での1回の採血を含む実験では、心臓穿刺または腹部大^動脈採血によって十分な量の血液を得ることができます1。ただし、一部の研究では、特に薬物動態および毒物学の研究において、薬物の吸収、分布、および代謝を決定するために繰り返し採血する必要がある、定期的な血液分析または生化学的分析のためにラットからの繰り返しの採血が必要です²。

現在、ラットからの採血には尾静脈採血が最も一般的な方法であるが、麻酔を必要としないにもかかわらず、この方法は繰り返し採取が困難な場合があり、採取される血液の量は比較的少ない^3,4。また、伏在静脈や陰茎静脈から採血はできるが、得られる血液の量は限られており、麻酔が必要である^1,5。さらに、顎下静脈神経叢、舌下静脈、頸静脈、鎖骨下静脈から採取された血液サンプルは、より高品質のサンプルを提供しますが、通常、麻酔または複数の個人の支援が必要です1,6,7,8,9。

プロトコル

この研究は、実験動物のケアと使用のためのガイドの第8版で概説されているガイドラインを順守しています¹³。この研究は、蘭州大学第二病院の倫理委員会から承認を受け、ARRIVEガイドライン2.0¹⁴に準拠して文書化されました。生後12〜16週齢の健康なWistarラット12匹(体重290〜330gの雄6匹と体重250〜280gの雌6匹)を、実際の実験の3日前に蘭州大学のGLP動物研究所に収容しました。使用したラットケージは、545mm×395mm×200mmのR5型で、オートクレーブ処理された寝具が備え付けられていました。すべてのラットには、餌と水の両方への無制限のアクセスが与えられました。実験室は平均湿度25%、平均気温24°C、昼と夜を交互に繰り返す光のサイクル(午前7:00/午後7:00)を維持しました。研究の結論として、すべての動物はイソフルランの過剰摂取を使用して人道的に安楽死させられました。この研究で使用した材料と機器に関する包括的な情報については、 材料表を参照してください。

1. サンプルサイズの計算と動物の選択

1. リソース方程式法¹⁵ を選択し、式(1)を使用して動物サンプルサイズを推定します。
   ....

ディスカッション

ラットでは、尾静脈採血が最も一般的な採血方法であるが、麻酔薬の影響を受ける可能性があり、尾静脈のサイズが小さいため、1回で採取できる血液量が限られ、採^血期間が長くなります^4,5。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-タンデム質量分析(MS/MS)システムとラット尾静脈のキャピラリーマイクロサンプリング(CMS)を組み合わせることで、ラット.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum