原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的检查

摘要

在这里，我们提出了一种检查原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的方案，该方案可用于及时治疗，此后避免相关并发症。

摘要

原发性干燥综合征 （pSS） 是一种自身免疫性疾病，其特征是口干、眼睛干涩和其他全身症状等症状。由于pSS患者所经历的唾液分泌减退，口腔菌群失调经常发生。pSS 的一个常见并发症是口腔 念珠菌 感染。在本文中，作者描述了可以有效诊断口腔 念珠菌 感染并使用唾液、口腔粘膜拭子或 pSS 患者漱口水识别 念珠菌 菌株的系统方法。Sabouraud 葡萄糖琼脂 （SDA）、菌丝形成试验、氢氧化钾 （KOH） 涂片试验和钙荧光白 （CFW） 染色试验用于诊断口腔 念珠菌 感染。 念珠菌 诊断琼脂用于鉴定 念珠菌 菌株。最后，使用抗真菌药敏试验来确定适当的抗真菌药物治疗。这种标准化方法可以促进pSS相关口腔 念珠菌 感染的诊断、治疗和未来研究。使用这种方法进行早期诊断还可以防止由于延迟接受适当治疗而出现的任何并发症。

引言

念珠菌病是由 念珠菌属引起的，念珠菌 属是机会性病原体。常见菌株包括 白色念珠菌、克鲁塞念珠菌、光滑念珠菌、副念珠 菌和 都柏林念珠菌¹。 念珠菌 属引起的机会性感染包括浅表 念珠菌 感染和侵袭性念珠菌病。侵袭性念珠菌病主要发生在免疫功能低下的个体中;例如，在患有获得性免疫缺陷综合症 （AIDS） 的患者中，侵袭性念珠菌病会严重威胁生活质量甚至寿命²。浅表 念珠菌 感染，如皮肤黏膜念珠菌病，在患者中更常见³.

口腔念珠菌病是一种浅表性 念珠菌 感染，是最常见的人类真菌感染。 白色念珠菌 是口腔的正常共生;据报道，在没有任何症状的一般人群中 ，念珠菌 属的携带率为 20%-75%⁴。 念珠菌 的过度生长会导致患者的局部不适，例如感觉味觉改变、口腔灼热感、营养不良导致的吞咽困难、恢复延迟和住院时间延长。长期口服念珠菌病可导致严重的侵袭性念珠菌病，导致严重的发病率和死亡率⁵.口腔念珠菌病也会增加患口腔癌的风险⁵.唾液腺功....

研究方案

下述所有程序均经首都医科大学附属北京天坛医院伦理委员会批准（编号：KY2023-177-01），参与本研究的所有患者均提供知情同意书。

1. 患者纳入和排除标准

1. 纳入标准：如果患者满足 2016 年美国风湿病学会 （ACR）/欧洲抗风湿病联盟 （EULAR） 标准¹²，则将患者分类为 pSS 患者。具体来说，最终分类标准基于五个项目的加权总和：抗 SSA/Ro 抗体阳性和局灶性淋巴细胞性唾液腺炎，焦点评分为 ≥ 1 个病灶/4 mm²，每个评分为 3;异常眼部染色评分为 ≥ 5（或 van Bijsterveld 评分为 ≥ 4），Schirmer 试验结果为 ≤ 5 mm/5 min，未刺激唾液流速为 ≤ 0.1 mL/min，每项评分为 1。具有提示 SS 的体征和/或症状且上述项目总分为 ≥ 4 分的个人符合 pSS 的标准。
2. 排除标准： 排除无法配合样本采集的患者和正在接受口腔 念珠菌 感染治疗的患者。
   注意：必须注意的是，下面描述的方法也适用于继发性SS个体口腔 念珠菌 感染的综合表征。
3. 为防止在念 珠菌 样本的收集、运输和培养过程中可能发生的污染，请采取细致的预防措施。这包括细致的实验准备、使用一次性和无菌材料、适当的标签、采样管的安全密封以及....

讨论

在目前的手稿中，我们提供了一系列系统、简单、可行的方法，用于检测口腔 念珠菌 感染、鉴定 念珠菌 菌株以及检测pSS患者常用药物的抗真菌敏感性。

在实际环境中，并非本手稿中介绍的所有方法都是必需的。口腔 念珠菌 检测方法可以根据具体目的进行选择。KOH 涂片试验和 CFW 染色试验使用未经培养的样本，可以快速、初步地确定 pSS 患者是否存在?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm Syringe Filter	MERCK	SLGV004SL
1.5 mL Centrifuge Tube	axygen	MCT-150-C-S
10 cm Microbiological Culture Dishes	Jet Bio-Filtration Co. Ltd	TCD000100
15 mL Centrifuge Tube	Jet Bio-Filtration Co., Ltd	CFT011150
50 mL Centrifuge Tube	Corning	430290
96-well Microplates	Corning	3599
API 0.85% NaCl ampule	BIOMERIEUX	20070
Calcofluor White Stain	Sigma-Aldrich	18909-100ML-F
CHROMagar Candida	CHROMagar	P002860	Candida diagnostic agar
D(+)-Glucose Monohydrate	Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd	10010518
Fetal Bovine Serum	Gibco	26170035
McFarland Standards Kit	BIOMERIEUX	70900
Nunc precision molded loops	ThermoFisher Scientific	254399
Phosphate Buffered Saline	Gibco	C10010500BT
Potassium Hydroxide	Aladdin	P112284-500g
PowerSoil DNA Isolation Kit	MO BIO	12888-50
RPMI 1640 Medium	Gibco	11875119
Sabourand's Agar Medium	Solarbio	S9710
Yeast Nitrogen Base Without Amino acids	Solarbio	Y8040
Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution)	BIOMERIEUX	14204