Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Здесь мы представляем протокол обследования кандидозной инфекции полости рта у пациентов с первичным синдромом Шегрена, который может быть использован для своевременного лечения и последующего предотвращения связанных с ним осложнений.
Первичный синдром Шегрена (pSS) — это аутоиммунное заболевание, характеризующееся такими симптомами, как сухость во рту, сухость глаз и другие систематические симптомы. Из-за гипосаливации, испытываемой пациентами с ПСС, часто возникает дисбактериоз полости рта. Распространенным осложнением ПСС является инфекция кандиды полости рта. В этой статье авторы описывают систематические методы, которые могут эффективно диагностировать кандидозную инфекцию полости рта и идентифицировать штаммы кандиды с помощью слюны, мазков слизистой оболочки полости рта или жидкости для полоскания рта у пациентов с ПСС. Для диагностики кандидозной инфекции полости рта используются агар декстрозы Сабуро (SDA), анализ образования гиф, мазок на гидроксид калия (KOH) и анализ окрашивания калькофтором белым (CFW). Диагностический агар Candida используется для идентификации штаммов Candida . Наконец, тестирование на чувствительность к противогрибковым препаратам используется для определения соответствующего противогрибкового лекарственного лечения. Этот стандартизированный метод может улучшить диагностику, лечение и будущие исследования кандидозных инфекций полости рта, связанных с псС. Ранняя диагностика с использованием этого метода также может предотвратить любые осложнения, возникающие из-за задержки в получении соответствующего лечения.
Кандидоз вызывается Candida spp., которые являются условно-патогенными микроорганизмами. Распространенные штаммы включают Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis и Candida dubliniensis1. Оппортунистические инфекции, вызванные Candida spp., включают поверхностные инфекции Candida и инвазивный кандидоз. Инвазивный кандидоз в основном встречается у людей с ослабленным иммунитетом; например, у пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) инвазивный кандидоз может значительно угрожать качеству жизни или даже продолжительностижизни2. Поверхностная кандидозная инфекция, такая как слизисто-кожный кандидоз, чаще встречается у пациентов3.
Кандидоз полости рта, поверхностная кандидозная инфекция, является наиболее распространенной грибковой инфекцией человека. Candida albicans — нормальный комменсал полости рта; сообщалось, что частота носительства Candida spp. колеблется от 20% до 75% в общей популяции без каких-либо симптомов4. Чрезмерный рост Candida может привести к местному дискомфорту у пациентов, такому как изменение вкуса чувствительности, жжение во рту, дисфагия из-за плохого питания, задержка выздоровления и длительное пребывание в больнице. Длительный кандидоз полости рта может привести к тяжелому инвазивному кандидозу, что приводит к значительной заболеваемости и смертности5. Кандидоз полости рта также может увеличить риск развития рака полости рта5. Нарушение функции слюнных желез является одним из факторов риска развития кандидоза полости рта6. Инициацией инфекции является адгезия Candida к стенкам клеток эпителия. За этим следует пролиферация и филаментация Candida , а также образование и созревание биопленки7. Биопленки чрезвычайно трудно искоренить, и они устойчивы к обычному противогрибковому лечению, что делает клиническое лечение проблемой для биопленкоассоциированной инфекции кандиды полости рта 7.
Первичный синдром Шегрена (pSS) — это аутоиммунное заболевание, которое характеризуется сухостью во рту, сухостью глаз и другими систематическими симптомами8. Сухость во рту является наиболее частым симптомом пСС. Слюна обладает важными физиологическими противогрибковыми функциями. С одной стороны, он может разбавлять и очищать ротовую полость, а затем удалять микроорганизмы со слизистой оболочки. С другой стороны, слюна содержит антимикробные белки, такие как лактоферрин, сиалопероксидаза, лизоцим, богатые гистидином полипептиды и специфические антикандидозные антитела, которые могут взаимодействовать со слизистой оболочкой полости рта и предотвращать чрезмерный рост Candida6. Снижение оттока слюны может предрасполагать пациентов с псс к кандидозу полости рта. Обсервационное перекрестное исследование, проведенное у 61 пациента с пСС, показало, что у 13,1% пациентов с ПС наблюдались оральные признаки кандидоза, а было обнаружено, что колониеобразующая единица (КОЕ)/мл Candida albicans значительно и отрицательно коррелирует с уровнями нестимулированной цельной слюны (UWS) и стимулированной цельной слюны (SWS)9.
Методы, представленные в этой рукописи, могут идентифицировать кандидозную инфекцию полости рта на основе характерных морфологических признаков (например, гиф и дрожжевых клеток) в прямом мазке или после культивирования10. Идентификация штамма Candida с помощью диагностического агара Candida основана на образовании разноцветных колоний с различной морфологией, которые возникают в результате расщепления хромогенных субстратов видоспецифичными ферментами11. В этой рукописи представлены систематические методы выявления кандидозной инфекции полости рта, включая традиционное бактериологическое исследование кандиды в полости рта и экспресс-исследование с помощью мазка на гидроксид калия (KOH) и теста на окрашивание калькофтором белым (CFW)10. Кроме того, был введен тест на чувствительность к противогрибковым препаратам, который может помочь в клиническом лечении кандидозной инфекции полости рта. В реальных ситуациях нет необходимости выполнять все методы, представленные в этой рукописи; пероральный метод (методы) обнаружения кандиды может быть выбран в соответствии с целью. Исследование кандидозной инфекции полости рта и определение штаммов Candida у пациентов с псс не только способствуют лечению заболевания, но и помогают оценить характеристику кандидоза полости рта и видовые профили.
Все процедуры, описанные ниже, были одобрены Этическим комитетом Пекинской больницы Тяньтань, Столичный медицинский университет (No KY2023-177-01), и все пациенты, участвующие в этом исследовании, дали информированное согласие.
1. Критерии включения и исключения пациентов
2. Забор образцов
3. Обработка образцов
4. Кандидозная культура
5. Идентификация штамма Candida
6. Анализ образования биопленки Candida
7. Анализ гифального образования
ПРИМЕЧАНИЕ: Только Candida , которая может образовывать гифы (например, Candida albicans), может быть индуцирована для образования гиф. Перейдите к шагу 8 для дальнейшей характеристики Candida , который не может образовывать гифы (например, Candida glabrata).
8. Тест мазка KOH и анализ окрашивания CFW
9. Тест на чувствительность к противогрибковым препаратам
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот тест проводится в соответствии с инструкциями производителя для набора для определения чувствительности к дрожжевым грибам (микроразведение; см. Таблицу материалов).
В этом исследовании 12 пациентов с pSS были отобраны в качестве репрезентативных пациентов и прошли скрининг на оральную кандидозную инфекцию (Таблица 1). Среди этих пациентов у некоторых пациентов наблюдались типичные поражения полости рта, вызванные инфекцией Candida , в...
В настоящей рукописи мы представляем ряд систематических, простых и осуществимых методов выявления инфекций Candida полости рта, идентификации штаммов Candida и тестирования чувствительности к противогрибковым препаратам у пациентов с pSS.
В практических условиях н?...
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.
Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (82201084), Китайским фондом постдокторантуры (2022M722232), Пекинским фондом постдокторских исследований (2023-ZZ-020), проектом Мяопу Пекинской больницы Тяньтань, Столичным медицинским университетом (2023MP10) и Общим исследовательским фондом, Советом по исследовательским грантам Гонконга (27111820 и 17116521).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
96-well Microplates | Corning | 3599 | |
API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены