Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Burada, primer Sjögren sendromlu hastalarda oral Candida enfeksiyonunun incelenmesi için zamanında tedavi ve daha sonra ilgili komplikasyonlardan kaçınmak için kullanılabilecek bir protokol sunuyoruz.
Primer Sjögren sendromu (pSS), ağız kuruluğu, kuru göz ve diğer sistematik semptomlar gibi semptomlarla karakterize otoimmün bir hastalıktır. pSS hastalarının yaşadığı hiposalivasyon nedeniyle, oral dysbacteriosis sıklıkla görülür. pSS'nin yaygın bir komplikasyonu oral Candida enfeksiyonudur. Bu makalede yazarlar, oral Candida enfeksiyonunu etkili bir şekilde teşhis edebilen ve pSS hastalarından tükürük, oral mukozal sürüntüler veya gargara kullanarak Candida suşlarını tanımlayabilen sistematik yöntemleri açıklamaktadır. Oral Candida enfeksiyonunun tanısı için Sabouraud Dekstroz Agar (SDA), hif oluşum testi, potasyum hidroksit (KOH) smear testi ve kalkoflor beyazı (CFW) boyama testi kullanılır. Candida suşlarının tanımlanması için bir Candida tanı agar kullanılır. Son olarak, uygun antifungal ilaç tedavisini belirlemek için antifungal duyarlılık testi kullanılır. Bu standardize edilmiş yöntem, pSS ile ilişkili oral Candida enfeksiyonlarının tanısını, tedavisini ve gelecekteki araştırmalarını geliştirebilir. Bu yöntemi kullanarak erken teşhis, uygun tedavinin alınmasında gecikme nedeniyle ortaya çıkan komplikasyonları da önleyebilir.
Kandidiyazis, fırsatçı patojenler olan Candida spp.'den kaynaklanır. Yaygın suşlar arasında Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis ve Candida dubliniensis1 bulunur. Candida spp.'nin neden olduğu fırsatçı enfeksiyonlar yüzeyel Candida enfeksiyonları ve invaziv kandidiyazis içerir. İnvaziv kandidiyazis esas olarak bağışıklığı baskılanmış kişilerde görülür; örneğin, edinilmiş immün yetmezlik sendromu (AIDS) olan hastalarda, invaziv kandidiyazis yaşam kalitesini ve hatta yaşam süresini önemli ölçüde tehdit edebilir2. Mukokutanöz kandidiyazis gibi yüzeysel Kandida enfeksiyonu hastalarda daha sık görülür3.
Yüzeysel bir Candida enfeksiyonu olan oral kandidiyazis, insanlarda en sık görülen mantar enfeksiyonudur. Candida albicans ağzın normal bir kommensalidir; Candida spp.'nin taşıma oranının genel popülasyonda herhangi bir semptom olmaksızın %20 ile %75 arasında değiştiği bildirilmiştir4. Candida'nın aşırı büyümesi, hastalarda duyu tadının değişmesi, ağızda yanma hissi, yetersiz beslenmeye bağlı yutma güçlüğü, gecikmiş iyileşme ve uzun süreli hastanede kalış süresi gibi lokal rahatsızlığa yol açabilir. Uzun süreli oral kandidiyazis ciddi invaziv kandidiyazise yol açarak önemli morbidite ve mortalite ile sonuçlanabilir5. Oral kandidiyazis de ağız kanseri riskini artırabilir5. Bozulmuş tükürük bezi fonksiyonu oral kandidiyazis için risk faktörleri arasındadır6. Enfeksiyonun başlaması, Candida'nın epitel hücre duvarlarına yapışmasıdır. Bunu Candida'nın çoğalması ve filamentasyonu ve biyofilm7'nin oluşumu ve olgunlaşması takip eder. Biyofilmlerin eradike edilmesi son derece zordur ve geleneksel antifungal tedaviye dirençlidir, bu da klinik tedaviyi biyofilm ile ilişkili oral Candida enfeksiyonu için bir zorluk haline getirir7.
Primer Sjögren sendromu (pSS), ağız kuruluğu, kuru göz ve diğer sistematik semptomlarla karakterize otoimmün bir hastalıktır8. Ağız kuruluğu, pSS'nin en sık görülen belirtisidir. Tükürük önemli fizyolojik antifungal fonksiyonlara sahiptir. Bir yandan, ağzı seyreltebilir ve ovalayabilir ve daha sonra organizmaları mukozadan uzaklaştırabilir. Öte yandan tükürük, laktoferrin, sialoperoksidaz, lizozim, histidin açısından zengin polipeptitler gibi antimikrobiyal proteinler ve oral mukoza ile etkileşime girebilen ve Candida6'nın aşırı büyümesini önleyebilen spesifik anti-kandidal antikorlar içerir. Azalan tükürük akışı, pSS hastalarını oral kandidiyazise yatkın hale getirebilir. 61 pSS hastasında yapılan gözlemsel kesitsel bir çalışma, pSS hastalarının %13.1'inin oral kandidiyazis belirtileri gösterdiğini ve Candida albicans'ın koloni oluşturan birimi (CFU)/mL'sinin uyarılmamış tam tükürük (UWS) ve uyarılmış tam tükürük (SWS) seviyeleri ile anlamlı ve negatif ilişkili olduğunu bulmuştur9.
Bu yazıda tanıtılan yöntemler, doğrudan yaymada veya kültürlemeden sonra karakterize edilen morfolojik özelliklere (örneğin, hif ve maya hücreleri) dayalı olarak oral Candida enfeksiyonunu tanımlayabilir10. Candida'nın bir Candida tanısal agar kullanılarak suş tanımlaması, türe özgü enzimler11 tarafından kromojenik substratların bölünmesinden kaynaklanan çeşitli morfolojiye sahip farklı renkli kolonilerin oluşumuna dayanır. Bu yazıda, geleneksel oral Candida kültürü ve potasyum hidroksit (KOH) smear testi ve kalkoflor beyazı (CFW) boyama testi10 ile hızlı inceleme dahil olmak üzere oral Candida enfeksiyonunu tespit etmek için sistematik yöntemler tanıtılmaktadır. Ek olarak, klinik oral Candida enfeksiyonu tedavisine rehberlik edebilecek antifungal duyarlılık testi tanıtılmıştır. Gerçek durumlarda, bu yazıda tanıtılan yöntemlerin tümünün uygulanması gerekli değildir; oral Candida tespit yöntem(ler)i amaca göre seçilebilir. Oral Candida enfeksiyonunun incelenmesi ve pSS hastalarında Candida suşlarının belirlenmesi sadece hastalık tedavisine fayda sağlamakla kalmaz, aynı zamanda oral kandidiyazisin karakterizasyonunun ve tür profillerinin değerlendirilmesine de yardımcı olur.
Aşağıda açıklanan tüm prosedürler, Başkent Tıp Üniversitesi, Pekin Tiantan Hastanesi Etik Komitesi (NO. KY2023-177-01) tarafından onaylanmıştır ve bu çalışmaya dahil olan tüm hastalar bilgilendirilmiş onam vermiştir.
1. Hasta dahil etme ve dışlama kriterleri
2. Örnek toplama
3. Numune işleme
4. Candida kültürü
5. Candida suş tanımlaması
6. Candida biyofilm oluşum deneyi
7. Hif oluşumu deneyi
NOT: Sadece hif oluşturabilen Candida ( Candida albicans gibi) hif oluşumu için indüklenebilir. Hif oluşturamayan Candida'nın ( Candida glabrata gibi) daha fazla karakterizasyonu için 8. adıma gidin.
8. KOH smear testi ve CFW boyama testi
9. Antifungal duyarlılık testi
NOT: Bu test, üreticinin Maya Benzeri Mantar Duyarlılık Kiti (Mikroseyreltme; bkz . Malzeme Tablosu) talimatlarına göre gerçekleştirilir.
Bu çalışmada, pSS'li 12 hasta temsili hasta olarak seçildi ve oral Candida enfeksiyonu açısından tarandı (Tablo 1). Bu hastalar arasında, bazı hastalarda açısal keilit (ağız köşelerinde çatlaklar, deskuamasyon ve hiperemi ile karakterize, Şekil 1A), dişeti mukozasında parlak kırmızı ödem, sarımsı beyaz lifli psödo-membran (Şekil 1B), lingual papilla atrofisi ve dilin parlak kırmızı dorsal mukozası (
Bu makalede, oral Candida enfeksiyonlarını tespit etmek, Candida suşlarını tanımlamak ve pSS'li hastalarda yaygın olarak kullanılan ilaçların antifungal duyarlılığını test etmek için bir dizi sistematik, basit ve uygulanabilir yöntem sunuyoruz.
Pratik ortamlarda, bu el yazmasında tanıtılan tüm yöntemler gerekli değildir. Oral Candida tespit yöntemi/yöntemleri, belirli bir amaca göre seçilebilir. KOH smear testleri ve CFW boyama testleri, k...
Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu araştırma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82201084), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (2022M722232), Pekin Doktora Sonrası Araştırma Vakfı (2023-ZZ-020), Pekin Tiantan Hastanesi Miaopu Projesi, Başkent Tıp Üniversitesi (2023MP10) ve Hong Kong Araştırma Hibeleri Konseyi (27111820 ve 17116521) tarafından desteklenmiştir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
96-well Microplates | Corning | 3599 | |
API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır