1.适当的样品处理： 制作解决方案

1. 带上干净的烧杯和大众正确的样品量到它。记录实际的大规模使用。在此示例中，腺嘌呤的解决方案是在容量瓶作为一种内部的标准用于下一个分析。腺嘌呤的质量是 100 毫克。做不直接大规模到容量瓶，因为它有一个长脖子和腺嘌呤不能轻松地添加或删除。
2. 添加约 25 毫升的溶剂 (在这种情况下二甲基亚砜 (DMSO)) 的烧杯和让它搅拌溶解。在此示例中，最后的解决办法是在 50 毫升的容量瓶，所以只添加约 25 毫升，所以可以冲洗烧杯和解决方案到最后卷组成。
3. 一旦溶解固体，溶液倒入容量瓶。
4. 冲洗烧杯和少量的溶剂，约 10 毫升，搅拌棒，倒入容量瓶的冲洗。重复两次以上。这有助于确保适当的解决方案转移。

2.内部标准校准曲线的制备

1. 气相色谱法分析准备所需的标准样品。在此示例中，从咖啡用乙腈提取咖啡因和腺嘌呤然后作为一种内部的标准用于测量。
2. 对于咖啡因的样本，称出 1 毫克/毫升样品所需的样品的取样量。如果使用 10 毫升的容量瓶，那是 10 毫克。
3. 进一只量杯权衡分析物，添加几毫升的溶剂 （这里的甲醇） 以溶解，然后定量地转移到容量瓶使用 3 冲洗。
4. 以类似的方式与 0.2、 0.5、 2 毫克/毫升咖啡因使 3 更多的标准。
5. 放在每个咖啡因 1 毫升标准样品瓶。
6. 添加到每个样品瓶 0.2 毫升的 2 毫克/毫升腺嘌呤内部标准。
7. 与每个咖啡因标准运行气相色谱法测定实验。对于每个色谱图，计算的峰面积为咖啡因 vs 比标准。
8. 绘制一个地区比 vs 的浓度比。那情节的斜率是响应因子。

3.与内部标准实际样品的制备气相色谱法

1. 气相色谱法分析的准备所需的样品。在此示例中，咖啡因被提取使用 acetrontrile 的咖啡。
2. 有关咖啡的示例，大规模出的咖啡注入 100 mL 烧杯 2 g。记录了咖啡的准确重量。
3. 向烧杯中添加 20 毫升的乙腈。
4. 让它坐了 20 分钟，不断搅拌。
5. 筛选出用漏斗滤纸咖啡的理由。
6. 冲洗过滤纸 3 x 与少量的乙腈 （5 毫升）。
7. 最后量度的滤液。它应该是大约 35 毫升。

4.运行示例并计算浓度

1. 取 1 毫升的咖啡提取物样品，在小瓶中添加 0.2 毫升的内部标准。将小瓶放入自动取样器机架。
2. 运行的样品的气相色谱分析。请确保 GC 条件这样的咖啡因和腺嘌呤分开。在此示例中，等温分色被执行在 200 ° c。
3. 经过分析，计算分析物的峰和内标峰的峰面积。使用他们的比率，计算样品中咖啡因的量。

5.咖啡因的内部标准结果： 气相色谱分析

1. 咖啡因的气相色谱分析如图 1所示。腺嘌呤用作内部的标准。峰面积比可以测量和绘制 vs 浓度的比例。边坡是情节的响应因子 （在本例中 1.8）。
2. 图 2显示了一份咖啡样品和腺嘌呤内部标准图谱。峰面积的比值是 1.78。使用响应因子和腺嘌呤 （0.33 毫克/毫升） 的已知的浓度，计算出未知样品中的咖啡因浓度是 0.33 毫克/毫升。

图 1。使用内标校正标度图。一块的面积比率 vs 浓度比值为 3 标准样品的咖啡因 （1，0.5 和 0.2 毫克/毫升） 0.33 毫克/毫升腺嘌呤内部标准添加到每个。直线的斜率是 1.8，即响应因子。

图 2。咖啡与腺嘌呤内部标准图谱。对样品的 FID 检测器响应一个阴谋。三个主峰是腺嘌呤 (IS)，咖啡因和棕榈酸。