在原肠胚形成过程中分离小鼠胚胎以进行单细胞 RNA 测序

在开始小鼠胚胎分离之前，用 70% 乙醇彻底清洁该区域。确保所有解剖工具都经过清洗和消毒。获得 5 毫升含有 10% FBS 的无菌 DMEM 和 20 毫升 DPBS，并将它们置于冰上。

接下来进行胚胎分离，使用带有透射光载物台和相机的立体显微镜，将适当安乐死的妊娠母犬仰卧，并用乙醇对阴道口附近的区域进行消毒。使用解剖剪刀和镊子，提起阴道口附近的皮褶，做一个小的 V 形切口，慢慢露出怀孕母犬的子宫。然后用镊子握住母膜的一端并沿着它切开，切出母膜的子宫角。

确保切除子宫颈。将子宫角放入含有冰上 DPBS 的 10 厘米培养皿中。用解剖剪刀和镊子，沿着植入部位去除子宫肌肉，并剪下每个植入部位或包含蜕膜肿胀的珍珠。

将其放入冰上 6 厘米培养皿中的新鲜 DPBS 中。取一个植入部位。将其放入立体显微镜载物台顶部的新的 6 厘米培养皿中，并向其中添加 500 微升 DPBS。

调整显微镜和光源的焦距。一只手用一副镊子按住着床部位，另一只手慢慢地将另一对镊子插入从子宫角切下的着床部位末端，逐渐露出乳肿大。为了露出胚胎，用一对镊子握住孤立的蜕膜肿胀的防误射端，然后用另一对镊子慢慢地从蜕膜肿胀端缓慢地进行大约四分之一大小的水平切口。

现在用两个镊子从蜕膜肿胀的防误射端慢慢推入，直到胚胎从新鲜切割的误射端弹出。一旦胚胎显露出来，就开始去除附着的任何额外的胚胎组织。如果壁层内胚囊和外胎盘锥体没有自发地从胚胎上脱落，请使用一对镊子将它们与任何相关的母体血液一起去除。

然后，在用一对镊子按住胚胎的同时，使用另一对镊子慢慢地从胚胎上剥下内脏卵黄袋。找到顶层内胚层囊和外胎盘锥。使用 AP 20 移液器，将含有不超过 10 微升 DPBS 的卵黄囊从培养皿中转移到冰上的 8 联排 PCR 管中。

拍摄新鲜分离的胚胎的明场照片，以确保窝伴侣的分期相似。用 P200 移液器将含有 50 微升含有 10% FBS 的 DMEM 的胚胎缓慢转移到保持在冰上的 1.5 毫升试管中。对所有蜕膜肿胀重复相同的操作，使用干净的工具和新的塑料进行每次隔离。