这种新方法使我们能够通过建立稳定的细胞接触,在含有非特异性亲水聚合物的流体缓冲溶液中,根据所需的单个细胞构建三维组件。在此视频中,我们将演示我们如何操作所需的单单元,以及如何构建无需人工基架的 3D 蜂窝组件。在这里,我们将以Dextran为例,在我们的媒介中展示实验过程。
首先,在25立方厘米的烧瓶中,用5毫升DMEM维持NAMRU小鼠乳腺上皮细胞,其中含有10%FBS和1%青霉素-链霉素。当准备继续时,使用吸气器取出补充的DMEM,并添加三到五毫升的PBS,预热至37摄氏度洗涤细胞。使用吸气器,从烧瓶中去除所有 PBS。
加入1.5毫升的尝试性,在37摄氏度下预热。在37摄氏度的CO2培养箱中孵育至少一到两分钟。在此之后,加入含有10%FBS和1%青霉素-链霉素的3.5毫升DMEM。
移液向上和向下混合。将电池悬浮液转移到15毫升离心管中,并在室温下以417倍G离心,3分钟。然后,吸气介质。
加入含有10%FBS和1%青霉素-链霉素的5毫米新鲜DMEM。如果需要,使用低温保存解决方案冷冻保存细胞,如制造商的说明所概述。首先混合10毫升DMEM辅以10%FBS和1%青霉素-链霉素0.8克Dxtran,以准备每毫升Dxtran溶液80毫克。
将这种 Dextran 溶液的 200 微升与先前准备的细胞悬浮液的 200 微升混合,形成每毫升 Dextran 介质含有 40 毫克的细胞悬浮液。首先,打开激光,请注意,使用波长在红色到近红外区域的激光束是最有效的。接下来,通过双击软件图标打开软件。
双击相机的图标,注意相应的显示屏将弹出。然后双击发光二极管的图标,对焦调整,以及移动阶段打开其显示器。首先将两个玻璃空间放在底盖玻璃滑梯上。
转移20微升,以前准备的Dextran补充细胞悬架到底盖玻璃滑梯。然后将顶盖玻璃幻灯片放在覆盖电池悬架的等位器上。将样品细胞放在下物镜上,用10微升蒸馏水进行水浸显微镜。
使用 10 微升蒸馏水将上部物镜连接到样品单元顶部。接下来,单击显微镜照明窗口中的"开/关"按钮以打开 LED。单击目标定位窗口中的方向按钮,调整样品与下部目标镜头之间的距离,直到其聚焦。
在信号衰减窗口中将每个激光束的强度设置为 1500 毫瓦。然后,单击两个激光图标,将激光束照射到位置 1 和位置 2。单击样本定位窗口中的方向按钮以移动样本级,直到单元格被困在位置 1。
单击并拖动光标,指示位置 2,直到另一个单元格被困在位置 2。首先,操作单个单元格,以便它与另一个单元格接触。保持此状态 300 秒,使细胞暴露在激光下 300 秒。
记录 x-y 轴。捕获另一个单元格并传输到前两个单元格以构造任意的 2D 单元格程序集。然后上下移动舞台以构建 3D 蜂窝组件。
确认即使在关闭激光后,组件仍然稳定。本研究将可溶性聚合物用于三元单细胞组件的构建。此处显示了使用双光束光学钳子形成的示例结构。
如果实验成功,即使在激光关闭后,这些蜂窝组件仍保持稳定。这一新方法用于在水介质中构建具有天然亲水聚合物的 3D 蜂窝组件。在再生医学和组织工程领域,它非常期望开始建造这种下一代细胞组件,并配有一些强大的工具。