合成肺腺癌细胞原位移植研究 pd-l1 表达

将小鼠肺腺癌细胞的正向移植到合成移植接受者中，可以研究在生理条件下完全活跃的免疫系统存在的情况下的肿瘤发生。当然，肿瘤发展成免疫能力小鼠，这是更多的生理，如果你进行免疫缺陷小鼠移植。移植前肿瘤细胞的基因编辑使该模型成为研究遗传因素对肿瘤生长和基因表达特征影响的直接和节省时间的方法。

与可移植的自生性肺肿瘤模型相比，该方法避免了小鼠的大量繁殖，因此代表了以往肺癌小鼠模型的细化。在开始手术之前，使用剪刀拆下导管针的端，将导管完全推到针的端。在确认对手趾捏没有反应后，将软膏涂抹在麻醉剂、协同的8至12周大小鼠的眼睛上，将上切口钩在插管平台上的缝合串上，胸部垂直于缝合。

将一根光纤电缆放在前肢之间，照亮胸部，并使用消毒的扁平钳子小心地张开嘴以提取舌头。寻找白光的发射，以定位喉部、表皮和大体类。一旦气管的开口清晰可见，轻轻地将导管滑入气管，最多但无法超越分叉，以保证肺腺癌细胞在肺内的均匀分布。

注意导管的插入非常光滑。如果您感到任何阻力，请取出导管并再次暴露气管，以避免伤害小鼠。快速从导管上取下针头，并检查是否可以观察到白光通过导管照射。

要确认导管在气管内正确放置，请将一毫升水注射器连接到导管上。注射器中的水应随着呼吸及时快速上下移动。在传递细胞悬浮液之前，用手加热细胞，将50微升的细胞加载到导管中。

一旦悬浮液被吸入，将一个空的一毫升注射器连接到导管，并给导管分配300微升空气，以确保肿瘤细胞在肺部的完整分布。然后轻轻取出导管，将鼠标放在热垫上，进行监控，直到完全卧位。在适当的实验终点后，将尸体浸泡在70%乙醇中，将动物固定到解剖板上。

做一个腹腔中线切口，轻轻反转皮肤，露出胸壁肌肉和腹部器官。用剪刀刺穿隔膜和切肋骨，露出胸腔。在左心室切一个小开口，使用 27 量针通过右心室三次用 6 到 8 毫升的冰冷 PVS 静脉输液来刺入肺。

上次灌注后，肺部应完全清除血液，出现白色。收获后，用剪刀将肺组织切碎成小块。将肺碎片转移到含有1.5毫升肺消化缓冲液的两毫升微离心管中，在37摄氏度下孵育30至60分钟，并摇动。

在消化结束时，通过70微米细胞过滤器将细胞悬浮液转移到50毫升管中，并使用无菌10毫升注射器柱塞的末端通过过滤器压压任何剩余的组织片段。用 15 毫升 PVS 冲洗过滤器，辅以 2%FCS。通过离心收集细胞。

将颗粒重新悬浮在一毫升氯化铵钾解液缓冲液中，在室温下孵育5分钟，并再次使细胞离心。然后将白细胞颗粒重新悬浮在一毫升PVS中，辅以2%FCS，根据实验方案染色细胞进行流动细胞测量分析。正如预期的那样，受助小鼠的生存与移植细胞的数量相关。

死亡时收获的肺表明肿瘤结节在所有叶中分布均匀。在比较自体肿瘤的肺部分与正畸移植的肺肿瘤细胞后肿瘤时，未观察到形态差异。正向肿瘤细胞移植到免疫能力小鼠三周后分离的肺细胞PD-L1表达的流量细胞测量分析，与体外培养的肺肿瘤细胞相比，揭示了PD-L1细胞表面标记表达的上调节。

在正畸移植之后，可以应用其他分析方法，包括免疫组织化学分析和mRNA分析，以解决其他实验问题。