שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח לגבי ביולוגיה במערכת העיכול, כגון כיצד שינויים בביטוי גנים או אתגרים סביבתיים משנים את תפקוד המעיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזה לוקח פחות זמן וקל יותר לבצע מאשר שיטות מסורתיות של מדידת המעבר במעיים. ביום ההתראה, הזחלים ניזונים ממזון המכיל תווית פלואורסצנטית, ו כשהם אוכלים את האוכל הזה, התווית תצטבר במעיים שלהם.
לאחר האכלה, הם שטוף, מופרדים ממזון שלא נאכל וכל זחל מועבר לתוך באר של צלחת רב באר. לבא יש תחתית חרוטית כך שכאשר החומר הצואה מבוטל, הוא נופל למרכז הבירה. עכשיו זכור, ישנם זחלים רבים בצלחת multi-well כי ניתן לפקח בו זמנית באמצעות ספקטרופוטומטר צלחת, אשר מודד את כמות החומר צואה בוטל.
ו ככל שיותר מתבטל עם הזמן, האות עולה בהתאם. בדרך זו, יש לנו שיטת תפוקה גבוהה למדידת המעבר במעיים. ביום הרביעי לאחר ההפריה, מפזרים שני מיליגרם של אבקת מזון דגים זחל על גבי המים בכל צלחת פטרי כדי להאכיל את הזחלים.
אפשר לזחלים ארבע שעות לאכול. לאחר האכלה, מעבירים את כל הזחלים לתבשיל שטיפה גדול המכיל מדיום עובר טרי. באמצעות פיפטה סרולוגית 50 מיליליטר, בעדינות ואקום כמה שיותר של מזון שאריות ככל האפשר, נזהר לא ללכוד כל זחלים.
מעבירים זחלים לצלחת פטרי חדשה המכילה 50 מיליליטר של מדיום עובר טרי. חזור על תהליך ההאכלה, השטיפת וההעברה במשך יומיים נוספים. ביום השישי שלאחר ההפריה, התחילו להכין את המזון הפלואורסצנטי על ידי הוספת 200 מיליגרם של מזון יבש לזכוכית שעון באורך 10 ס"מ.
מוסיפים 300 מיקרוליטרים של תווית פלואורסצנטית ו-100 מיקרוליטרים של מים מיונים ומערבבים בקצרה. מורחים את הדבק שנוצר לשכבה דקה על השעון ומאפשרים לו להתייבש בטמפרטורת החדר, בחושך, במשך שמונה שעות לפחות. לאחר מכן, לגרד את התערובת היבשה את השעון.
לרסק אותו לאבקה ולאחסן אותו בטמפרטורת החדר, בחושך. ביום השביעי שלאחר ההפריה, להאכיל את המזון פלואורסצנטי לזחלים על ידי מפזרים שני מיליגרם של אותו על גבי המים בכל צלחת פטרי. אפשר לזחלים לאכול במשך שעתיים.
בינתיים, להכין את פתרונות מינון מרוכז על ידי המסת כל תרכובת הבדיקה במדיום העובר לריכוז כי הוא פעמיים את מינון היעד עם נפח סופי של לפחות 2.5 מיליליטר. בסוף תקופת ההאכלה, השתמש פיפטה העברה להעביר אותם צלחת שטיפה גדולה. יש לשטוף את כל הזחלים שתוארו בעבר בשאוב אבק מחמיר יותר.
חשוב להסיר כמה שיותר משאריות המזון הפלואורסצנטי במהלך השטיפה הסופית כדי להפחית את האפשרות שהוא מועבר בטעות לצלחת 96 באר. לאחר כל זחל הוא שטף, השתמש פיפטה למשוך אותו יחד עם 100 microliters של מדיום העובר מן צלחת שטיפה. מחלקים את הזחל ואת כל 100 המיקרוליטרים של המדיום לתוך באר של פוליסטירן 96 באר, תחתית חרוטית, צלחת מרובת בארות.
לאחר שכל הזחלים הועברו, הוסיפו 100 מיקרוליטרים של פתרונות המינון המוכנים לבאנות המתאימות. לאחר כל פתרונות מינה נוספו, לטעון את הצלחת לתוך ספקטרופוטומטר צלחת. למדוד את הפלואורסצנטיות מהצלחת מלמטה, חמש פעמים ברציפות, מבלי לנער את הצלחת.
הקריאה הנמוכה ביותר מכל באר תוגדר כפרואורסצנטיות הראשונית שלה במהלך ניתוח נתונים. דגירה את הצלחת בערך 28 מעלות צלזיוס. חזור על תהליך המדידה, קריאת הפלואורסצנטיות כל 20 דקות במשך השעתיים הראשונות לאחר מינון, ודגירה בין קריאות.
למדוד את הפלואורסצנטיות כל 30 דקות במשך השעות השלישית והרביעית לאחר מיום ולאחר מכן לבצע מדידות לפי שעה במשך שעות חמש עד שמונה. דגירה הזחלים ב 28 מעלות צלזיוס לילה. למחרת, לקרוא את הפלואורסצנטיות ב 24 שעות לאחר מום.
פרוטוקול זה משתמש בספקטרופוטומיה מבוססת לוחות כדי להעריך את המעבר של GI כתחליף לתפוקה גבוהה למיקרוסקופיה פלואורסצנטית. תוצאות מייצגות המשווות בין שתי שיטות אלה נוצרות על-ידי ניתוח דגים שטופלו באופן זהה במשך 24 שעות לאחר מינון. כפי שניתן לראות כאן, התוצאות מתואמות מאוד, עם שיפוע שלילי מכיוון שמיקרוסקופיה מודדת את אות הפלואורסצנטיות ה שנשמר וספקטרופוטומטריה מודדת את האות המועבר.
ניתוח של תרכובות עם מנגנונים שונים מגלה כי בהשוואה לפקדים שטופלו ברכב, אטרופין ו amitriptyline איטי GI תחבורה. טגאסרוד ומטוקלופראמיד, לעומת זאת, נראים כדי להאיץ את זמן המעבר. אריתרומיצין, אשר היה צפוי להאיץ את זמן המעבר המבוסס על תגובת יונקים, נראה במקום זאת אין השפעה על זמן המעבר של דגי זברה.
ניתוח נוסף מדגים כי אטרופין מאט את המעבר GI, מינון תלוי, בזחלים דג זברה. המינון הנמוך ביותר שנבדק, 042 micromolar, לא הייתה השפעה משמעותית. בעוד שתי מינונים גבוהים יותר נראים כל יש השפעה משמעותית.
שיטה זו כוללת יישומים רבים, כולל גילוי השפעות GI רעילות מסמים או מועמדים לסמים, מידול מחלות, כגון תסמונת המעי הרגיז, גילוי טיפולים חדשניים למחלות כאלה, כמו גם גילוי של תרכובות פרו-קינטיות.
