研究基因和蛋白质水平的过程在作物研究中至关重要。我们的方法能够检查分泌的迷宫蛋白,在不同的感染边和组织具有最高的空间时间分辨率。特洛伊木马方法探索有用的自动分泌功能。
它绕过耗时和具有挑战性的迷宫变换,并促进对迷宫中分泌蛋白质的详细研究。有关添加的迷宫叶、流苏和耳朵正确感染的详细资料。并展示了目标组织中感染进展和蛋白质功能的成功研究。
演示这个程序的将是伊莎贝尔·菲德勒,一个来自实验室的研究生。要开始实验,使用无菌巴氏菌移液器从尿板中刮出 Eumadous。接种5毫升的YES光介质与尤马杜斯。
在 28 摄氏度下生长培养,在 200 rpm 下持续摇晃 16 小时。第二天,将 900 微升的新鲜 YEPS 灯与 100 微升的隔夜文化混合在一起。在分光光度计分析中,使用 YEPS 光介质作为空白测量 OD-600。
用新鲜的 YEPS 光介质稀释过夜文化,使 O-600 的 2。让培养在 28 摄氏度时生长,在 200 rpm 时持续摇晃,直到达到中日志生长阶段,8 到 1.0 的 OD-600 表示。孵育后,通过旋转细胞3000次气10分钟来收获细胞。
丢弃上一杯。接下来,用DDH2O的1个培养量洗涤细胞堆。旋转细胞在3000时间气10分钟,并丢弃上一液。
然后,使用 20 毫升玻璃移液器在 DDH2O 中小心地重新悬挂细胞桩。因此,调整特洛伊木马检测的最终 OD-600 到 3.0 或 1.0 用于疾病评级。培养迷宫植物到成年叶的阶段,其中至少叶7生长在茎内。
接下来,将 Eumads 培养素转移到 3 毫升注射器中,并用 20 量表双皮下针。小心按茎以本地化镜茎组织。镜茎的基座可以通过从较硬的茎向较软的组织的过渡来区分。
用钢笔在茎上标记镜茎。注射1.5毫升的尤马杜斯培养1厘米以上的拍摄镜茎或花序镜茎。一旦迷宫植物到达流苏阶段,请小心按茎,将流苏本地化在茎中。
用笔标记茎上的流苏尖端和底座。将 Eumads 培养器转移到 3 毫升注射器中,用 20 量双皮下针注射流苏周围总共 1.5 毫升的注射剂。为保证幼崽的均匀分布,请缓慢地将 5 毫升放在笔尖、中间和用笔标记的流苏底座上。
将 Eumads 培养器与 20 量双皮下针转移到 3 毫升注射器中。将接种针注射到壳叶之间的空间中,在不伤害耳朵的情况下,释放耳朵周围1.5毫升的接种剂。接下来,取出注射器和针头,并仔细按摩球状,以平均分配 Eumadous 溶液。
在 PD 木炭螺旋板上滴 10 微升的 inolum。然后在室温下孵育2天。分泌 ZM Mach1 的 Hyphae 被荧光和樱桃信号包围着。
相比之下,非秘密催眠只显示真菌细胞质中的荧光信号。与均匀分布相比,流苏定位不当或配金不均匀会导致未感染流苏或仅部分感染流苏。独奏致病特洛伊木马Progenester应变SG-200,培养在PD木炭螺旋钻,形成白色绒毛丝在板上,如图所示。
而尤马杜斯菌株FB1要求在传染性丝形成前交配。感染后,可以使用各种方法(包括疾病评分或显微成像)分析特洛伊木马肝蛋白的可能反应。对于许多病原体,转化和分泌是被充分理解的,可以以类似的方式探索。
因此,它们支持对主机的研究,这些主机不易受转换的影响。