L’étude des processus sur les niveaux génétiques et protéiques est cruciale dans la recherche sur les cultures. Notre approche permet l’inspection des protéines de labyrinthe sécrétées avec la résolution temporelle spatiale la plus élevée à différents côtés et tissus d’infection. La méthode cheval de Troie explore des capacités de sécrétion automates utiles.
Il contourne les transformations de labyrinthe longues et difficiles, et facilite des études détaillées sur les protéines sécrétées dans l’appelplatz labyrinthe. Informations détaillées sur l’infection appropriée des feuilles de labyrinthe ajoutées, glands et oreille. Et montre l’étude réussie de la progression de l’infection et la fonction protéique dans le tissu cible.
Isabell Fiedler, étudiante diplômée du laboratoire, démontrera la procédure. Pour commencer l’expérience, grattez Eumadous à partir d’une plaque de pediatr à l’aide d’une pipette pasteur stérile. Inoculer 5 millilitres de YEPS Light Medium avec Eumadous.
Cultivez la culture à 28 degrés Celsius, avec des secousses constantes à 200 rpm pendant 16 heures. Le lendemain, mélangez 900 microlitres de lumière YEPS fraîche avec 100 microlitres de la culture nocturne. Mesurez l’OD-600 à l’aide du milieu lumineux YEPS comme blanc dans l’analyse du spectrophotomètre.
Diluer la culture de nuit avec frais YEPS Light Medium à un OD-600 de 2. Laissez la culture croître à 28 degrés Celsius avec des secousses constantes à 200 rpm, jusqu’à ce qu’elle atteigne la phase de croissance du rondin moyen, indiquée par un OD-600 de 8 à 1,0. Après l’incubation, récolter les cellules en les faisant tourner à 3000 fois chi pendant 10 minutes.
Jeter le surnatant. Ensuite, lavez la pilette cellulaire une fois avec 1 volume de culture de DDH2O. Faire tourner les cellules à 3000 chi temps pendant 10 minutes et jeter le supernatant.
Ensuite, suspendez soigneusement la pilette cellulaire dans DDH2O, à l’aide d’une pipette en verre de 20 millilitres. Ajustant ainsi l’OD-600 final à 3.0 pour un essai de cheval de Troie ou 1.0 pour l’évaluation de la maladie. Cultivez les plantes du labyrinthe à un stade de feuilles adultes, où au moins la feuille 7 pousse dans la tige.
Ensuite, transférez la culture eumadous dans une seringue de 3 millilitres avec une aiguille bi une hypodermique de calibre 20. Appuyez soigneusement sur la tige pour localiser le tissu de tige miroir. La base de la tige miroir peut être distinguée par une transition de la tige plus dure aux tissus plus mous.
Marquez la tige miroir sur la tige à l’aide d’un stylo. Injectez 1,5 millilitres de culture Eumadous 1 centimètre au-dessus de la tige du miroir shoot ou de la tige miroir d’inflorescence. Une fois que les plantes du labyrinthe atteignent le stade du gland, appuyez soigneusement sur la tige pour localiser le gland dans la tige.
Marquez la pointe et la base du gland sur la tige à l’aide d’un stylo. Transférer la culture eumadous dans une seringue de 3 millilitres avec une aiguille hypodermique bi une de calibre 20 pour injecter un total de 1,5 millilitres de l’inoculum autour du gland. Pour assurer une répartition égale de l’inoculum, placez lentement 5 millilitres à la pointe, au milieu et à la base du gland marqué du stylo.
Transférer la culture eumadous dans une seringue de 3 millilitres avec une aiguille hypodermique bi une de calibre 20. Injecter l’aiguille d’inoculation dans l’espace entre les feuilles d’enveloppe aussi profondément que possible sans blesser l’oreille, puis libérer 1,5 millilitres de l’inoculum autour de l’oreille. Ensuite, retirez la seringue et l’aiguille et massez soigneusement l’épi pour distribuer la solution Eumadous également.
Déposer 10 microlitres d’inoculum sur une plaque d’auger au charbon de bois. Puis incuber à température ambiante pendant 2 jours. Hyphae sécrétant ZM Mach1 sont entourés de signal fluorescent et cerise.
En revanche, les hyphes nonsecreting montrent seulement le signal fluorescent dans le cytoplasme fongique. Une localisation inappropriée du gland ou une répartition inégale de l’inoculum peut entraîner une infection non infectée du gland ou seulement une infection partielle du gland par rapport à la distribution uniforme. La souche solo pathogène Trojan Horse Progenester SG-200, cultivé sur la tarière de charbon de bois, forme des filaments de peluches blanches sur la plaque comme indiqué.
Alors que la souche eumadous FB1 nécessite un accouplement avant la formation de filaments infectieux. Après l’infection, la réponse possible des signes de la protéine hépatique cheval de Troie peut être analysée en utilisant diverses méthodes, y compris les cotes de la maladie ou l’imagerie microscopique. Pour de nombreux agents pathogènes, la transformation et la sécrétion sont bien comprises et peuvent être explorées de la même manière.
Par conséquent, ils permettent l’étude de l’hôte, qui ne sont pas sensibles à la transformation.
