Исследование процессов на генетическом и белковом уровнях имеет решающее значение в исследованиях сельскохозяйственных культур. Наш подход позволяет осмотреть секретные белки лабиринта с наивысшим пространственным временным разрешением на разных сторонах инфекции и тканях. Метод троянского коня исследует полезные возможности автоматической секретории.
Он обходит трудоемкие и сложные преобразования лабиринта, и облегчает детальные исследования секретных белков в лабиринте аппельплац. Подробная информация о надлежащей инфекции добавленных листьев лабиринта, кисточки и ухо. И показывает успешное изучение прогрессирования инфекции и белковой функции в ткани-мишени.
Демонстрацией процедуры будет Изабель Фидлер, аспирант из лаборатории. Чтобы начать эксперимент, поцарапать Eumadous от pediatr пластины с помощью стерильных пастер пипетки. Прививка 5 миллилитров YEPS Light Medium с Eumadous.
Выращиваем культуру при 28 градусах Цельсия, с постоянной тряской при 200 об/мин в течение 16 часов. На следующий день смешайте 900 микролитров свежего YEPS Light со 100 микролитров ночной культуры. Измерьте OD-600 с помощью YEPS Light Medium в качестве пробела в анализе спектрофотометра.
Разбавьте ночную культуру свежим YEPS Light Medium до OD-600 из 2. Пусть культура растет на 28 градусов по Цельсию с постоянной тряской при 200 об/мин, пока не достигнет средней фазы роста журнала, указанной OD-600 от 8 до 1,0. После инкубации, урожай клеток, вращая их в 3000 раз чи в течение 10 минут.
Откажитесь от супернатанта. Далее, мыть клетки свайт один раз с 1 объем культуры DDH2O. Спин клетки на 3000 времени чи в течение 10 минут и отказаться от супернатанта.
Затем, повторно приостановить ячейки свайт тщательно в DDH2O, используя 20 миллилитров стеклянной пипетки. Таким образом, корректировка окончательного OD-600 TO 3.0 для анализа троянского коня или 1,0 для оценки заболеваний. Выращивайте растения лабиринта до стадии взрослых листьев, где по крайней мере лист 7 растет в стебле.
Затем перенесите культуру Eumadous в 3 миллилитровый шприц с 20 калибровочных би одной подкожной иглой. Нажмите стебель тщательно, чтобы локализовать зеркальные стволовые ткани. Основание Зеркального Стебля можно отличить переходом от более трудного стебля к более мягкой ткани.
Отметь Зеркальный Стебель на стебле с помощью ручки. Ввись 1,5 миллилитров eumadous культуры 1 сантиметр выше Стрелять Зеркало Ствол или Соцветие Зеркало Ствол. Как только растения лабиринта достигнут стадии кисок, нажмите стебель тщательно, чтобы локализовать кись в стебле.
Отметте кончик и основание киистой на стебле с помощью ручки. Перенесите культуру Eumadous в 3 миллилитровый шприц с 20 калибровочным би одной подкожной иглой, чтобы ввести в общей сложности 1,5 миллилитров инокулума вокруг кистойки. Чтобы обеспечить равное распределение инокулума, медленно поместите 5 миллилитров на кончике, середине и основании кистой, отмеченных ручкой.
Перенесите культуру Eumadous в 3 миллилитровый шприц с 20 калибровочных би одной подкожной иглой. Ввесите иглу прививки в пространство между листьями шелухи как можно глубже, не повреждая ухо, а затем отпустите 1,5 миллилитров инокулума вокруг уха. Затем снимите шприц и иглу и тщательно массируйте початок, чтобы распределить раствор Eumadous поровну.
Капля 10 микролитров инокулума на PD уголь овечка пластины. Затем инкубировать при комнатной температуре в течение 2 дней. Hyphae, секретирующий QM Mach1, окружен флуоресцентным и вишневым сигналом.
В отличие от этого, несекретные гифы показывают только флуоресцентный сигнал в грибковой цитоплазме. Неправильная локализация кистой или неравное распределение инокулума может привести к неинфекции кистой или лишь частичной инфекции кистой по сравнению с тивым распределением. Соло патогенных троянский конь Progenester штамм SG-200, культурный на PD уголь овсяный, образует белый пух нити на пластине, как показано на.
В то время как штамм Eumadous FB1 требует спаривания перед инфекционным образованием нити. После заражения, возможная реакция признаков белка печени троянского коня может быть проанализирована с помощью различных методов, включая оценки заболеваний или микроскопической визуализации. Для многих патогенов, преобразование и секреция хорошо изучены и могут быть изучены аналогичным образом.
Таким образом, они позволяют изучать хозяина, которые не подвержены трансформации.
