Genetik ve protein düzeyleri ile ilgili süreçlerin araştırılması mahsul araştırmalarında çok önemlidir. Yaklaşımımız, farklı enfeksiyon yan larında ve dokularda en yüksek mekansal zamansal çözünürlüğe sahip salgılanan labirent proteinlerinin incelenmesini sağlar. Truva Atı Yöntemi yararlı automatous salgı yetenekleri araştırıyor.
Zaman alıcı ve zorlu labirent dönüşümlerini atlatır ve labirent appelplatz içinde salgılanan proteinler üzerinde ayrıntılı çalışmalar kolaylaştırır. Eklenen labirent yapraklar, püsküller ve kulak uygun enfeksiyon hakkında ayrıntılı bilgi. Ve hedef dokuda enfeksiyon ilerlemesi ve protein fonksiyonu başarılı çalışma gösterir.
Prosedürü gösteren Isabell Fiedler, laboratuvardan yüksek lisans öğrencisi olacak. Deneye başlamak için, steril bir pasteur pipetkullanarak bir pediatr plakaeumadous çizik. Eumadous ile YEPS Hafif Orta 5 mililitre aşılamak.
16 saat boyunca 200 rpm sürekli sallayarak, 28 santigrat derece kültür büyümek. Ertesi gün 900 mikrolitre taze YEPS Işığı ile 100 mikrolitrelik bir gecede karıştırın. OD-600'ü YEPS Light Medium kullanarak spektrofotometre analizinde boş olarak ölçün.
Taze YEPS Light Medium ile gece kültürünü 2 od-600'e seyreltin. Kültür 200 rpm sürekli sallayarak 28 derece santigrat büyümeye izin, orta günlük büyüme aşamasına ulaşana kadar, 8-1.0 bir OD-600 ile gösterilir. Kuluçkadan sonra hücreleri 3000 kez 10 dakika döndürerek hasat edin.
Supernatant atın. Daha sonra hücre piletini 1 kültür hacmi dDH2O ile bir kez yıkayın. Hücreleri 3000 zaman chi'de 10 dakika döndürün ve süpernatant'ı atın.
Daha sonra, 20 mililitrelik cam pipet kullanarak Hücre lisi DDH2O'da dikkatlice askıya alın. Böylelikle son OD-600 TO 3.0 bir Truva Atı tahlil veya hastalık derecelendirme için 1.0 ayarlama. En az yaprak 7 sap içinde yetişir yetişkin yapraklar, bir aşamaya labirent bitkileri yetiştirmek.
Sonra, 20 gauge bi bir hipodermik iğne ile 3 mililitrelik şırınga içine Eumadous kültürü aktarın. Ayna Kök Dokusunu yerelleştirmek için sapı dikkatlice bastırın. Ayna Sapı tabanı daha sert saptan daha yumuşak dokuya geçişle ayırt edilebilir.
Ayna Sapını kalem kullanarak sapına işaretleyin. Shoot Mirror Stem veya Çiçeklenme Ayna Sapı üzerinde 1,5 mililitre Eumadous kültürü enjekte edin. Labirent bitkileri püskül aşamasına ulaştıktan sonra, sapı sapı lokalize etmek için dikkatle tuşuna basın.
Ucunu ve püskültabanını bir kalem kullanarak sapına işaretleyin. Püskül etrafında inokül toplam 1.5 mililitre enjekte etmek için 20 gauge bi bir hipodermik iğne ile 3 mililitreşlik şırınga içine Eumadous kültürü aktarın. Inoküleşit dağılımını sağlamak için, yavaş yavaş ucu, orta ve püskül tabanı kalem ile işaretlenmiş 5 mililitre yerleştirin.
Eumadous kültürünü 20 gauge bi one hipodermik iğneile 3 mililitrelik şırıngaya aktarın. Kulak yaralanması olmadan mümkün olduğunca derin kabuk yaprakları arasındaki boşluğa aşılama iğne enjekte, sonra kulak etrafında inokül 1.5 mililitre bırakın. Daha sonra, şırınga ve iğne çıkarın ve dikkatle eşit Eumadous çözüm dağıtmak için cob masaj.
PD kömür burgu plaka üzerinde inoculum 10 mikrolitre bırakın. Daha sonra 2 gün oda sıcaklığında kuluçkaya yat. ZM Mach1 salgılayan hyphae floresan ve kiraz sinyali ile çevrilidir.
Buna karşılık, nonsecreting hyphae sadece mantar sitoplazmasında floresan sinyal gösterir. Inokülün yanlış püskül lokalizasyonu veya eşit olmayan dağılımı, püskülün eşit dağılıma göre enfekte olmayan püskül veya sadece kısmi enfeksiyonuna neden olabilir. Pd kömür burgu kültürlü solo patojenik Truva Atı Progenester suşu SG-200, gösterildiği gibi plaka üzerinde beyaz kabarık filamentler oluşturur.
Eumadous suşu FB1 bulaşıcı filament oluşumundan önce miyon gerektirir iken. Enfeksiyon dan sonra, Truva Atı karaciğer proteini olası yanıt hastalık derecelendirme veya mikroskobik görüntüleme de dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılarak analiz edilebilir. Birçok patojen için dönüşüm ve salgı iyi anlaşılmıştır ve benzer bir şekilde araştırılabilir.
Bu nedenle, dönüşüme açık olmayan ev sahibinin çalışmasını sağlarlar.
