유전 및 단백질 수준에 프로세스를 조사하는 것은 작물 연구에서 중요합니다. 우리의 접근은 다른 감염 측및 조직에 가장 높은 공간 측두성 해상도를 가진 분비한 미로 단백질의 검사를 가능하게 합니다. 트로이 목마 방법은 유용한 오토마토 분비 기능을 탐구한다.
그것은 시간이 많이 걸리고 도전적인 미로 변환을 우회하고, 미로 아펠 플라츠 내에서 분비 된 단백질에 대한 자세한 연구를 용이하게한다. 추가 된 미로 잎, 술 및 귀의 적절한 감염에 대한 자세한 정보. 및 표적 조직에서 감염 진행 및 단백질 기능에 대한 성공적인 연구를 보여줍니다.
절차를 시연하는 것은 실험실에서 졸업생인 이사벨 피들러(Isabell Fiedler)가 될 것입니다. 실험을 시작하려면 멸균 저온 살균 기르 파이펫을 사용하여 페디아트 플레이트에서 유마두를 긁습니다. 유마두와 YEPS 빛 매체의 5 밀리리터를 접종.
16시간 동안 200rpm에서 일정한 흔들림으로 28도에서 문화를 성장시다. 다음날 신선한 YEPS 빛의 900 마이크로리터와 100 마이크로리터의 하룻밤 문화를 혼합합니다. YEPS 라이트 매체를 분광광계 분석에서 빈 값으로 사용하여 OD-600을 측정합니다.
신선한 YEPS 라이트 매체로 하룻밤 문화를 희석하여 OD-600의 2개에 희석합니다. 문화권이 200rpm에서 일정한 흔들림으로 섭씨 28도에서 성장하게 하고, 8~1.0의 OD-600으로 표시된 중간 로그 성장 단계에 도달할 때까지. 인큐베이션 후, 10 분 동안 3000 번 치로 회전하여 세포를 수확하십시오.
상부체를 폐기합니다. 다음으로, DDH2O의 배양부 1부로 셀 필렛을 한 번 세척한다. 셀을 3000시간 치에서 10분 동안 회전시키고 상체를 폐기합니다.
그런 다음, 20 밀리리터 유리 파이펫을 사용하여 DDH2O에서 셀 필렛을 조심스럽게 다시 중단합니다. 따라서 트로이 목마 분석에 대한 최종 OD-600 ~ 3.0 또는 질병 등급의 경우 1.0을 조정합니다. 미로 식물을 성인 잎의 단계로 육성하여 적어도 잎 7이 줄기 안에서 자랍니다.
다음으로, 유마드 문화를 20 게이지 bi 하나의 피하 바늘로 3 밀리리터 주사기로 옮는다. 줄기를 조심스럽게 눌러 거울 줄기 조직을 국소화하십시오. 거울 줄기의 베이스는 더 단단한 줄기에서 부드러운 조직으로의 전환으로 구별 될 수 있습니다.
펜을 사용하여 줄기에 거울 줄기를 표시합니다. 촬영 거울 줄기 또는 꽃무성 거울 줄기 위의 유마드 문화의 1센티미터 1.5 밀리리터를 주입합니다. 미로 식물이 술 단계에 도달하면 줄기를 조심스럽게 눌러 줄기의 술들을 국소화하십시오.
펜을 사용하여 줄기에 술의 끝과 베이스를 표시합니다. 유마드 문화를 3 밀리리터 주사기로 옮기고 20 게이지 bi 1 피하 바늘을 사용하여 술 주위의 접종비의 총 1.5 밀리리터를 주입합니다. 무접종의 동등한 분포를 보장하기 위해 펜으로 표시된 술의 끝, 중간 및 바닥에 5 밀리리터를 천천히 놓습니다.
유마드 문화를 20 게이지 bi 1 피하 바늘로 3 밀리리터 주사기로 옮는다. 귀를 손상시키지 않고 가능한 한 깊게 껍질 잎 사이의 공간에 접종 바늘을 주입한 다음 귀 주위의 접종 비응고 1.5 밀리리터를 방출합니다. 다음으로 주사기와 바늘을 제거하고 조심스럽게 코브를 마사지하여 유마드 용액을 동등하게 분배합니다.
PD 숯 오거 플레이트에 10 마이크로리터의 접종을 떨어 뜨립니다. 그런 다음 실온에서 2 일 동안 배양하십시오. Hyphae 분비 ZM Mach1은 형광및 체리 신호로 둘러싸여 있습니다.
대조적으로, 비분균 최면은 곰팡이 세포질에서 형광 신호를 보여줍니다. 부적절한 술 국소화 또는 부동적 분포는 비감염된 술또는 짝수 분포에 비해 술의 부분적인 감염을 초래할 수 있다. PD 숯 오거에서 배양된 솔로 병원성 트로이 목마 프로게스터 균주 SG-200은 표시된 대로 접시에 흰색 보풀 필라멘트를 형성합니다.
유목민 균주 FB1 전염성 필라멘트 형성 전에 짝짓기를 필요로하는 동안. 감염 후, 트로이 목마 간 단백질의 가능한 반응은 질병 등급 또는 현미경 이미징을 포함한 다양한 방법을 사용하여 분석될 수 있다. 많은 병원균의 경우, 변형과 분비도 잘 이해되며 유사한 방식으로 탐구 할 수 있습니다.
따라서 변환에 취약하지 않은 호스트의 연구를 활성화합니다.
