大鼠肾上腺皮质细胞的原代培养及非甾体功能的测定

提出的协议是非常容易的，它将帮助研究人员准备初级肾上腺培养。它提供了一个简单的程序，开始肾上腺类固醇发生。该技术可用于筛查与压力相关的疾病，所有代理抑制炎症反应的潜力。

演示这个程序的将是我实验室的硕士生李伟昌。首先使用70%乙醇对安乐死SD大鼠进行消毒，让它被吸收到皮肤中。用纸巾擦拭皮肤后，将大鼠放在干净的塑料板上。

接下来，使用外部弯曲钳子在中线抬起皮肤。使用剪刀从大腿水平到子成本角创建 Y 形，对皮肤进行钝解剖。用70%乙醇冲洗剪刀后，切肌肉，也形成Y形。

在肝脏后面的右胃后找到左肾上腺。用一对标准钳子和一对弯曲的钳子，抬起胃和肝脏，然后用另一个弯曲的钳子分离肾上腺，并把它们放入无菌盘中。使用精细钳子小心地将肾上腺从每个腺体中移出。

现在，用一把精致的剪刀将肿瘤切成小块，用足够量的无血清DMEM F-12介质覆盖组织。准备三个不同浇注尺寸的巴氏移液器，通过加热燃烧器。使用第一个具有最大开口的移液器，将所有肾上腺碎片转移到含有胶原蛋白酶 II 的 50mL 锥形管中。

然后在37摄氏度的水浴中孵育管子20分钟，每5分钟摇动一次，总共4次。在酶消化过程中正确执行组织分散是非常关键的。使用第二个，然后最小的倒大小移液器重复移液和孵育，直到所有组织件变小。

然后在四摄氏度的冷介质中加入六倍体积的啤酒，以停止酶反应。然后在 800 次 G 下中分 10 分钟，并丢弃两次上一液。添加适当的介质体积，然后重新挂起单元格。

在95%的湿度和5%的二氧化碳中，将细胞种植在所需的盘子或碗中，在37摄氏度下过夜。第二天，用无血清、温暖的DMEM F-12基基仔细清洗细胞两次。加入新鲜生长介质，将细胞保持37摄氏度、95%的湿度和5%的二氧化碳，直到第3天。

利用此协议，获得了原培养大鼠肾上腺细胞。第3天肾上腺细胞在相位对比显微镜下得到确认。第3天培养物进行的脂肪分化相关蛋白质的免疫荧光染色证实，细胞质内的囊泡是脂质液滴。

在大鼠肾上腺细胞的肾上腺素激素刺激后，通过皮质酮测定细胞的激素生成能力，显示皮质酮释放增加，ACTH浓度较高。该方法可应用于其他初级培养系统，如原发性心脏培养、肾上腺内腺培养等。这种技术还可能有助于研究肾上腺皮质细胞和色度芬细胞之间的相互作用。