具有稳定的人类状古特微生物群落和人类免疫系统的双人性化BLT小鼠模型

我们的协议意义重大，因为它可用于复制产生具有人类肠道微生物群和人类免疫系统的小鼠。我们称这些老鼠为双人性化小鼠。双人性化小鼠模型可用于基础和转化生物医学研究，包括研究人类肠道微生物群与人体免疫系统之间的体内关系。

演示该程序的将是博士后张建水和来自我们实验室的博士生张一伦。要将肝脏和胸腺组织植入左肾胶囊，首先将鼠标放入护罩中。在手术当天，以每克体重剂量12美分的剂量治疗全身亚致命照射小鼠。

在确认适当水平的电前和中侧后，将鼠标在左侧和中侧周围剃须。将眼科软膏涂抹在动物的眼睛上，并根据需要涂抹耳标。用三种连续碘和70%异丙醇磨砂消毒皮肤。

当皮肤已准备后，使用钳子将一至一至六毫米立方的人类胎儿肝脏组织片段加载到一个特罗卡中，然后将一到一至十六毫米的立方人类胎儿胸腺组织片段加载到三元体状体中。使用钳子抬起皮肤，并使用手术刀将小纵向切入皮肤。将鼠标左侧的切口扩展到 1.5 到 2 厘米。

并使用钳子提升肌肉层。用剪刀纵向打开肌肉层，必要时延长切口，露出肾脏，轻轻抓住肾脏周围的脂肪组织。使用手术刀在肾胶囊的后端进行一到两毫米的切口，然后缓慢地将预装的小刀插入与肾脏长轴平行的切口中。

释放肾胶囊和肾脏之间的组织，并返回肾脏和肠道到其正常位置。然后，使用缝合线关闭肌肉层和手术钉，以关闭皮肤。将鼠标放入自动杀菌的微隔离器保持架中，并监控直至完全保持。

手术后6小时，将小鼠放在热灯下，用70%异丙醇对尾巴进行消毒。将200微升PBS中分离的1.5至5倍10至5个阳性的人类胎儿肝脏组织分离造血干细胞注射到每只动物一个扩张的尾静脉中。然后用温和的压力停止任何出血，将老鼠还回他们的家笼。

手术后9至12周，使用适当大小的整形梳约束来隔离一只人性化小鼠的一条腿，并喷洒70%异丙醇的隔离腿的中侧。将抗生素和止痛软膏传播到收集现场。使用以 90 度角保持的 25 量针，刺穿沙芬静脉，将 50 到 100 微升血液收集到 EDTA 涂层的血收集管中。

获得适当量血后，用无菌纱布向现场施加压力，以止血，然后再将鼠标返回到其笼中。然后使用采集的外周血样本，使用对人CD45、CD3、CD4、CD8、CD19和小鼠CD45的抗体，通过流式细胞测定来评估人体免疫细胞重组水平。对于新鲜的粪便样本收集，将个别的自 <3> <3>化纸袋放入烟罩中，将一只鼠标放入每个袋子中，直到每个动物排便。

然后将小鼠返回到笼子，并使用无菌钳子将每个粪便样本转移到每只小鼠一个 1.5 毫升管中，以储存零下 80 摄氏度。在14天的抗生素治疗结束时，将饮用水更换为自动消毒水，将小鼠转移到新的自洗笼中。抗生素停止后24小时和48小时解冻适当准备的粪便微生物移植材料来源，并在厌氧条件下将样品在厌氧室中等。

为了进行粪便移植，通过口服球菌将200微升的粪便微生物移植材料送到每个实验动物身上，并在人工小鼠的皮毛上或笼内床上用品上传播任何剩余的解冻物质。此处，显示了手术后 10 周人工 BLT 小鼠的外周血液流动细胞学分析示例。T和B细胞群都可以识别，也可以识别CD4和CD8阳性T细胞子集。

在此图中，可以观察到用于转移肠道微生物群以创建双人性化小鼠的人类粪便供体样本的相对丰度。抗生素治疗引起的脾脏和塞库姆的表型变化与无细菌动物的表型变化相似。这一代表性的16S核糖体RNA测序数据的主要成分分析图显示，双人性化小鼠具有人类类的肠道微生物群系，这是人类供体样本所独有的。

该协议最关键的方面是限制有害细菌的引入，以确保小鼠保持健康，并维持人类肠道微生物群。该模型具有推进个性化医学的潜力，并使我们能够研究人类疾病如何影响肠道微生物群，同时控制其他缓解因素。