创建鸟类前脑嵌合体以评估面部发育

这种方法允许研究人员评估基底前脑和面部之间的组织相互作用。该技术的主要优点是它可以分离基底前脑进行评估，并防止神经嵴细胞污染，这会混淆分析。该技术的困难部分是从宿主中取出前脑并用供体组织替换。

演示该程序的将是来自Ralph Marcucio博士实验室的研究科学家Diane Hu。首先，用中性红色、玻璃转移移液器和锋利的钨制备 DMEM 培养基。使用 10 毫升注射器和 18 号针头，从蛋壳的尖端取出 0.5 毫升白蛋白。

用剪刀尖在壳的顶部开一个小孔。然后将一块胶带放在孔上，并切开一个圆形开口以暴露胚胎。用中性红色染色胚胎。

从第七或第八阶段胚胎的基底前脑左侧收获组织移植物。使用弯曲的锋利钨针轻轻切开前脑的一部分。为了不包括下面的内胚层，将针头滑到前脑下方并平行于神经管的轴。

使用玻璃移液管从供体胚胎中取出移植物，并将其转移到含有中性红色的DMEM中两分钟以使其染色。然后将染色的移植物放入不含中性红色的DMEM中，直到准备植入。将白勒霍恩鸡的受精卵在 37 摄氏度的加湿室中孵化，直到汉堡-汉密尔顿第 7 至 8 阶段。

如前所述暴露胚胎。使用锋利的钨针，通过切割然后去除0.3×0.2毫米的基底前脑片来准备移植部位以容纳移植物。避免过度破坏底层内胚层，这将很明显，因为蛋黄颗粒将开始通过任何撕裂泄漏。

将移植物转移到宿主后，放置移植物以替换已切除的宿主基底前脑。将胶带紧紧地贴在孔上，然后将胚胎放回37摄氏度的培养箱中，直到它们准备好进行分析。最初，嵌合体是通过将鹌鹑组织移植到雏鸡胚胎中而产生的。

使用QCPN抗体，可视化鹌鹑细胞并将其与宿主组织区分开来。鹌鹑雏系统证实，所有移植物仅由神经组织组成，没有被其他细胞类型污染。将鹌鹑组织移植到鸭胚胎中，由于鹌鹑大脑发育较快，导致嵌合体严重畸形。

因此，将鸭组织移植到鸡胚胎中。由此产生的鸭雏嵌合体表明大脑参与调节形态。采用全山C2杂交法评估声波刺猬在嵌合体中的表达情况。

与形态相似，嵌合体鸭侧的索尼克刺猬表情看起来更像鸭子。准备主机站点需要练习。大量的胚胎不能存活，因此创建大量的嵌合体可以帮助确保适当的样品进行分析。

这种方法使得评估来自大脑的信号如何塑造额鼻外胚层区域的索尼克刺猬表达域成为可能。