Этот метод позволяет исследователям оценить взаимодействие тканей между базальным передним мозгом и лицом. Основное преимущество этого метода заключается в том, что он изолирует базальный передний мозг для оценки и предотвращает загрязнение клетками нервного гребня, что может запутать анализ. Сложной частью этой техники является удаление переднего мозга у хозяина и замена его донорской тканью.
Продемонстрирует процедуру Диана Ху, научный сотрудник лаборатории доктора Ральфа Маркучио. Для начала подготовьте носитель DMEM с нейтральным красным цветом, стеклянной пипеткой для переноса и заточенным вольфрамом. С помощью шприца объемом 10 миллилитров и иглы 18 калибра удалите 0,5 миллилитра альбумина с заостренного конца яичной скорлупы.
Сделайте небольшое отверстие поверх скорлупы с помощью ножниц. Затем поместите кусок ленты поверх отверстия и вырежьте круглое отверстие, чтобы обнажить эмбрион. Окрасьте зародыш нейтральным красным цветом.
Собирают тканевые трансплантаты с левой стороны базального переднего мозга эмбрионов седьмой или восьмой стадии. Используйте изогнутые заостренные вольфрамовые иглы, чтобы аккуратно надрезать кусочек переднего мозга. Чтобы не включать нижележащую энтодерму, проведите иглу под передним мозгом параллельно оси нервной трубки.
Возьмите трансплантат у донорского эмбриона с помощью стеклянной пипетки для переноса и перенесите его в DMEM, содержащий нейтральный красный цвет, на две минуты, чтобы окрасить его. Затем поместите окрашенный трансплантат в DMEM, который не содержит нейтрального красного цвета, до тех пор, пока он не будет готов к приживлению. Инкубируйте оплодотворенные яйца от белой курицы породы Леггорн при температуре 37 градусов по Цельсию в увлажненной камере до седьмой-восьмой стадии Гамбургера-Гамильтона.
Экспонируйте эмбрионы, как было продемонстрировано ранее. Используя заостренные вольфрамовые иглы, подготовьте место трансплантата, разрезав, а затем удалив кусок базального переднего мозга размером 0,3 на 0,2 миллиметра для размещения трансплантата. Избегайте чрезмерного разрушения основной энтодермы, что будет очевидно, когда гранулы желтка начнут просачиваться через любой сделанный разрыв.
После переноса трансплантата хозяину расположите трансплантат так, чтобы заменить экстирпированный базальный передний мозг хозяина. Плотно наклейте ленту на отверстие и верните эмбрионы в инкубатор с температурой 37 градусов по Цельсию, пока они не будут готовы к анализу. Изначально химеры создавались путем пересадки тканей перепелов в эмбрионы птенцов.
С помощью антитела QCPN клетки перепелов визуализировали и отличали от тканей хозяина. Система перепелов-цыплят подтвердила, что весь трансплантат состоял только из нервной ткани и не был загрязнен другими типами клеток. Трансплантация тканей перепелов в эмбрионы уток привела к сильно деформированным химерам из-за более быстро развивающегося мозга перепелов.
Поэтому была проведена трансплантация тканей утки куриным эмбрионам. Полученные химеры утки-цыплят предполагают, что мозг участвует в регуляции морфологии. Цельная горная гибридизация C2 была использована для оценки экспрессии звукового ежа в химерах.
Подобно морфологии, выражение лица ежа Соника на утиной стороне химеры казалось более утиным Подготовка хост-сайта требует практики. Большое количество эмбрионов не выживает, поэтому создание большого количества химер может помочь обеспечить надлежащие образцы для анализа.
Этот метод позволил оценить, как сигналы от мозга формируют домен экспрессии ежа Sonic в лобноназальной эктодермальной зоне.
