在体内 小鼠劣质橄榄中的钙成像

劣质橄榄是杜拉最腹腔的部分，因此在活的动物中很难到达。在这里，我们引入了一个协议，暴露成年小鼠大脑的茎从心室侧，并使用GINGIN镜头记录神经元活动在低劣的橄榄神经元表达钙传感器。这种方法避免了对生命危急脑干的损伤，并有助于研究空间-时间活动模式和低劣橄榄中的输入整合。

由于手术是在有许多重要结构的复杂咽喉区域进行的，因此必须由具有高级外科技能的研究人员进行。通过从 20 号导管尖切开 5 到 6 毫米长和 0.8 毫米宽的缝隙来准备一个管子。通过切断尖端、沙化断裂表面并用钳子弯曲来准备钝弯曲的针头。

这将用于支持气管切除术期间的气管。用盐水稀释每毫升氯胺酮15毫克至15%组装手术工具和消耗品。将加热垫设置为 38 摄氏度。

在立体塔式框架中水平转动鼻锥 180 度。称量以前由携带病毒的 GCaMP6s 传播的劣质橄榄的老鼠，并计算稀释的氯胺酮注射量。预填充感应盒5%异氟素，并麻醉鼠标。

将鼠标安装在立体声框架中，通风侧向上。剃掉老鼠的喉咙和大腿区域。用脱毛霜去除残留的头发。

在喉咙皮肤上涂抹木糖果冻。用直肠热传感器监测鼠标温度。在内皮注射一毫升预热盐水。

通过大力捏住后肢脚趾来评估麻醉的深度。不应调用可检测响应。沿着中线在喉咙皮肤上做一个垂直切口。

使用钝解剖方法将颈部皮肤与下部内脏分离，并切断皮肤。从结缔组织中释放唾液腺，并横向翻转它们，以暴露胸甲状腺肌肉覆盖的气管。以每公斤动物体重五毫升的速度注射第一剂稀释氯胺酮。

小心地沿着中线分裂胸甲状腺肌肉，用细钳尖露出气管。使用钝解剖方法，用钳子将气管从血管和食道中分离。以每公斤动物体重2.5毫升的速度注射第二剂稀释氯胺酮。

横向在气管下插入钝针。用钝针抬起气管。使缝合线绕第三个气管环，用半圆针对甲状腺进行剖腹产。

在这个戒指上做四个乐器领带。用相同的半圆针刺穿胸部皮肤，并引导线穿过皮肤。用线轻轻抬起气管，将气管切成甲状腺。

将气管拉向胸皮。通过在气管下面添加一小块手术海绵来提升气管的开口。用细条清洁组织去除气管开口端内剩余的任何液体。

将异黄素流从立体氧化鼻锥切换到插管。将插管插入气管。确保管子中的部分缝隙留在气管外，以便呼吸。

通过制作三到四个仪器领带，将气管固定在鼠标胸皮上。将气管与缝合线连接起来，以确保插管安全。用细钳将甲状腺肌肉沿着肌肉纤维切开。

用弹簧剪刀切断隔离部分。小心地从肌肉中释放剩余的气管和喉部，以尽量减少肌肉对血管的损伤。去除剩余的气管和喉部。

用钳子从附着的组织中释放食道，用弹簧剪刀将其切断。取出覆盖脑系统和地图集腹腔拱的纵向肌肉。取出覆盖地图集腹腔拱门和前块茎的肌肉。

用荣格切割地图集的腹腔拱门。取出地图集前块茎。取出血液和液体，查看前兆巨无霸和脑干。

通过去除带荣格的骨骼来扩大前兆巨无霸。取出软骨，用细钳小心地剥去杜拉母体的近层，清晰地观察心室的脑部。将 SPO2 传感器夹在小鼠大腿上，以监测心率、氧饱和度和呼吸速率等生命体征。

将 GRIN 镜头安装在植入棒上。用70%浸泡乙醇的清洁组织仔细清洁镜头。将植入棒固定在立体氧化框架上，并在植入棒上安装微型显微镜。

在脑筋急转弯区域加入几滴盐水，以浸入G GRIN镜头。使用格林镜头接近脑电系统。在表面区域表示劣质橄榄神经元的GCaMP6s可以在矩形区域找到，约0.5至1.7毫米的轮状到剩余的地图集，约2.6至1.1毫米横向到中线。

打开微型显微镜中的激发蓝色 LED，以定位 GCaMP6s 转染的劣质橄榄神经元。由于 GCaMP6s 表达水平不同，神经元显示不同的基线荧光强度。左边视频中圆的劣质橄榄神经元 somata 钙含量的变化将向我们展示三角洲 F 被右边的 F 痕迹除以。

虽然老鼠保持温暖和水分，它不可避免地会被长期麻醉和手术削弱。保持手术时间短是必不可少的，这样小鼠的身体状况就适合记录。熟练的研究人员可以在70分钟内完成手术。

这种方法，修改后，可用于研究心室脑系统的其他相邻区域。