成人斑马鱼的部分肝切除术

该协议将允许研究人员利用现有的化学和遗传工具来研究斑马鱼肝脏再生的机制。部分肝切除术允许组织精确切除，刺激肝脏再生，而无需有毒肝损伤对全身的影响。只有了解肝脏再生的分子和细胞机制，才能设计治疗晚期肝病患者的新疗法。

首先，用钳子将鱼从特里卡因鱼缸中取出，并把它们嵌入三卡因浸泡海绵的凹槽中，并向上放在腹腔侧。然后将海绵置于自上而下照明的解剖显微镜下。用细钳捏紧皮肤和鳞片，在机身腔内用弹簧装剪刀在钳子下切开一个洞。

旋转海绵，沿着腹部切口三到四毫米，向骨盆鳍后切。然后将海绵旋转回来。用一只手挤压海绵的两侧，迫使内脏器官从体腔中取出。

肝脏的腹叶存在于肠道顶部，肝脏是一种粉红色或橙色的结构，分布在金棕色的肠道上，可以清晰地通过CFP荧光进行可视化。挤压细钳，使锡相互接触，并在肝脏和肠道之间滑动锡。然后慢慢分离锡，打破肝脏和肠道之间的入口静脉附着。

重复这个过程，直到肝脏和肠道之间的所有入口连接被切断，并使用细钳将腹叶从肠道中拉出。将腹叶从肝脏的其他部分切开。对具有CFP荧光的动物的检查表明，腹叶已被切除。

完成后，小心地将鱼从海绵转移到含有系统水的水箱中，并将系统水流过刺上几分钟，直到鱼恢复并自行游泳。对鱼实施安乐死后，将其从冰水中取出。将其放在海绵的凹槽中，与腹腔侧向上，并在心脏的前后部位置切口体壁。

然后从第一个切口的边缘再切两个切口，沿着前后轴运行到骨盆鳍，然后剥回皮肤和肌肉，露出内脏器官。内脏器官现在可以通过明亮的磁场和荧光显微镜进行可视化。通过计算肝脏与体重比率来估计部分肝切除术后的肝脏恢复，男性为1.8%，女性为3.3%。

两性肝体重比在手术后零点和部分肝切除术和假控制中确定。手术后零点，假动物有可见的腹腔叶，但在部分肝切除动物中，腹腔叶完全缺失，导致雄性减少30%，雌性肝体重比降低20%。在部分肝切除动物手术后的第七天，腹腔叶没有再生，部分肝切除术和假对照组的肝体重比是可比的，表明部分肝切除术后肝脏质量恢复。

时间对心室叶再生的影响是通过进行1/3的局部肝切除术和测量腹腔叶与肠道长度的比例来确定的。腹腔叶在假对照中占据了肠道长度的50%至100%，但在1/3的部分肝切除动物中严重减少。手术后第36天的部分肝切除动物的腹腔叶与肠道的比例与手术后第一天相比有所增加。

与第一天相比，手术后第36天从部分肝切除术中恢复的动物的腹腔叶大小在统计学上显著增加，但不是在虚假控制中。有些动物再生了腹叶，但有些没有，这表明手术反应的变化。这个协议最关键的部分是干净地分离肝脏和肠道，以便可以完全切除腹腔叶。

斑马鱼的部分肝切除术可以以突变或转基因线进行，以检测肝脏再生的遗传要求。