Bu protokol, araştırmacıların zebra balıklarındaki karaciğer yenilenme mekanizmalarını incelemek için mevcut kimyasal ve genetik araçlardan yararlanmalarını sağlayacaktır. Kısmi hepatektomi, toksik karaciğer hasarının vücut çapındaki etkilerine gerek kalmadan karaciğer yenilenmesini teşvik etmek için dokunun kesin olarak çıkarılmasını sağlar. Ancak karaciğer yenilenmesinin moleküler ve hücresel mekanizmalarını anlayarak ileri karaciğer hastalığı olan hastaları tedavi etmek için yeni tedaviler tasarlayabiliriz.
Başlamak için, balıkları tokaları kullanarak Tricaine tankından çıkarın ve ventral tarafı yukarı olacak şekilde Tricaine ıslatılmış bir süngerin oluğuna gömün. Daha sonra süngeri yukarıdan aşağıya aydınlatmalı bir kesme mikroskobu altına yerleştirin. İnce önps ile cildi ve pulları kalbe hemen arka olarak sıkıştırın ve yaylı makasla tokaların altında bir kesim yaparak vücut boşluğunda bir delik oluşturun.
Süngeri döndürün ve pelvik yüzgeçlere doğru arka arka keserek karın boyunca üç ila dört milimetrelik bir kesi yapın. Sonra süngeri geri döndürün. Visseral organları vücut boşluğundan çıkarmak için süngerin kenarlarını bir elinizle sıkın.
Karaciğerin ventral lobu bağırsağın üstünde bulunur ve karaciğer altın kahverengi bağırsağa yayılmış pembe veya turuncu bir yapıdır ve CFP floresan ile açıkça görselleştirilebilir. İnce kaleleri, tinelerin birbirine değmesi için sıkın ve tineleri karaciğer ve bağırsak arasında kaydırın. Daha sonra karaciğer ve bağırsak arasındaki portal damar bağlantılarını kırmak için tenekeleri yavaşça ayırın.
Karaciğer ve bağırsak arasındaki tüm portal bağlantıları kopana kadar bu işlemi tekrarlayın ve ince tokparlamalar kullanarak ventral lobunu bağırsaktan çekin. Ventral lobun karaciğerin geri kalanından arındırın. Hayvanın CFP floresan ile incelenmesi, ventral lobun çıkarıldığını göstermektedir.
Bittiğinde, balıkları süngerden sistem suyu içeren tanka dikkatlice aktarın ve balık kendi kendine iyileşene ve yüzene kadar sistem suyunu birkaç dakika solungaçların üzerinden akar. Balıkları ötenazi ettikten sonra buzlu sudan çıkarın. Ventral tarafı yukarıda olan bir süngerin oluğuna yerleştirin ve kalbin ön arka pozisyonunda ventral vücut duvarının bir kesisini yapın.
Daha sonra ön arka eksen boyunca pelvik yüzgeçlere kadar uzanan ilk kesinin kenarlarından iki kesi daha yapın ve visseral organları ortaya çıkarmak için cildi ve kası soyun. Viseral organlar artık hem parlak alan hem de floresan mikroskopi ile görselleştirilebiliyor. Kısmi hepatektomi sonrası karaciğer iyileşmesi, erkeklerde %1,8, kadınlarda %3,3 olan karaciğerin vücut ağırlığı oranı hesaplanarak tahmin edildi.
Her iki cinsiyetin karaciğer-vücut ağırlığı oranı ameliyat sonrası sıfır, kısmi hepatektomi ve sham kontrollerinde yedinci günde belirlendi. Ameliyat sonrası sıfır gününde, sham hayvanların görünür bir ventral lobları vardır, ancak kısmi hepatektomi hayvanlarında, ventral lob tamamen yoktu, bu da erkeklerde% 30 azalmaya ve karaciğer kadınlarının vücut ağırlığı oranlarına% 20 azalmasına neden oldu. Kısmi hepatektomi hayvanlarında yedinci ameliyat sonrası günde, ventral lob yenilenmedi ve kısmi hepatektomi ve sham kontrollerinde karaciğerden vücut ağırlığı oranları karşılaştırılabilirdi, bu da kısmi hepatektomi sonrası karaciğer kütlesinin geri kazanıldığını gösteriyordu.
Zamanın ventral lob rejenerasyonuna etkisi tam 1/3 kısmi hepatektomi yapılarak ve ventral lobun bağırsak uzunluğu oranına ölçülmesi ile belirlendi. Ventral lob, sham kontrollerinde bağırsak uzunluğunun% 50 ila 100'ünü işgal etti, ancak 1/3 kısmi hepatektomi hayvanlarında ciddi şekilde azaldı. Ameliyat sonrası 36. günde kısmi hepatektomi hayvanlarında ilk gün ameliyat sonrası ile karşılaştırıldığında ventral lobdan bağırsak oranına kadar artış gözlendi.
Ameliyat sonrası 36. günde kısmi hepatektomiden iyileşen hayvanlarda ilk güne göre istatistiksel olarak anlamlı bir artmış ventral lob büyüklüğü gözlenmiştir, ancak sahte kontrollerde gözlenmemiştir. Bazı hayvanlar ventral lobu yenilemiş, ancak bazıları değil, ameliyat tepkisinde değişim olduğunu gösterir. Bu protokolün en kritik kısmı, ventral lobun tamamen çıkarılabilmesi için karaciğeri ve bağırsağı temiz bir şekilde ayırmaktır.
Zebra balıklarında kısmi hepatektomi, karaciğer yenilenmesi için genetik gereksinimleri test etmek için mutant veya transgenik çizgilerde yapılabilir.
