이 프로토콜은 연구원이 제브라피시에 있는 간 재생의 기계장치를 공부하기 위하여 유효한 화학 및 유전 공구를 이용하는 것을 허용할 것입니다. 부분 간 절제술은 독성 간 손상의 신체 전체 효과에 대한 필요없이 간 재생을 자극하는 조직의 정확한 제거를 할 수 있습니다. 간 재생의 분자 및 세포 메커니즘을 이해 함으로써 우리는 고급 간 질환을 가진 환자를 치료 하기 위해 새로운 치료를 설계할 수 있습니다.
먼저, 집게를 사용하여 트리카인 탱크에서 물고기를 제거하고 복부 측이 위로 있는 트리카인에 젖은 스폰지의 홈에 포함시려면. 그런 다음 스폰지를 하향식 조명으로 해부 하는 현미경 아래에 놓습니다. 피부와 비늘은 미세한 집게로 심장에 후방을 꼬집어 스프링로드 가위로 집게 아래에 컷을 만들어 신체 구멍에 구멍을 만듭니다.
스폰지를 회전시키고 골반 지느러미쪽으로 후방절단하여 복부를 따라 3~4밀리미터 절개를 합니다. 그런 다음 스폰지를 다시 회전시십시오. 한 손으로 스폰지의 측면을 짜서 내장 장기를 신체 구멍에서 강제로 내쫓습니다.
간의 복부 엽은 장의 위에 존재하며, 간은 황금 갈색 장 위에 퍼지는 분홍색 또는 주황색 구조이며 CFP 형광으로 명확하게 시각화 될 수 있습니다. tines가 서로 만지고 간과 창자 사이 tines를 밀어 않도록 미세 한 집게를 짜내십시오. 그런 다음 과자를 천천히 분리하여 간과 장 사이의 포털 정맥 부착물을 끊습니다.
간과 장 사이의 모든 포털 연결이 끊어질 때까지이 과정을 반복하고 미세 한 집게를 사용하여 장에서 복부 엽을 당깁니다. 간의 나머지 부분에서 복부 엽을 잘라. CFP 형광을 가진 동물의 검사는 복부 엽이 제거되었다는 것을 보여줍니다.
완료되면, 조심스럽게 시스템 물을 포함하는 탱크에 스폰지에서 물고기를 전송하고 물고기가 회복하고 스스로 수영 할 때까지 몇 분 동안 아가미 위에 시스템 물을 스트리밍합니다. 물고기를 안락사 한 후, 얼음 물에서 제거합니다. 복부 쪽을 위로 스폰지의 홈에 놓고 심장의 전방 후방 위치에 복부 바디 월을 절개합니다.
그런 다음 전방 후방 축을 따라 골반 지느러미에 이르는 첫 번째 절개 가장자리에서 두 개의 절개를 더 하고 피부와 근육을 벗겨 내장 장기를 드러냅니다. 내장 기관은 지금 밝은 필드와 형광 현미경 검사법 둘 다로 시각화될 수 있습니다. 부분 간 절제술 후 간 회복은 남성1.8%,여성 3.3%였던 체중 비율을 계산하여 추정하였다.
남녀 모두의 간 체중 비율은 수술 후 0일, 부분 간 절제술및 가짜 대조군에서 7일째에 결정되었습니다. 수술 후 날 제로에서, 가짜 동물은 눈에 보이는 복부 엽을 가지고 있지만, 부분 간 절제술 동물에서, 복부 엽은 완전히 결석했다, 이는 남성의 30 % 감소와 체중 비율에 간 여성의 20 % 감소의 결과. 수술 후 7일째에는 부분 적인 간절제술동물에서 복부 엽이 재생되지 않았고, 부분 간 절제술과 가짜 대조군에서 간 체중 비율이 비슷하여 부분 간 절제술 후 간 질량을 회복했음을 나타냅니다.
복부 엽 재생에 대한 시간의 효과는 전체 1/3 부분 간 절제술을 수행하고 장 길이 비율로 복부 엽을 측정함으로써 결정되었다. 복부 엽은 장 길이의 50~100%를 차지했지만, 1/3 부분 간 절제술 동물에서 심각하게 감소되었습니다. 수술 후 36일째에 부분 적인 간 절제술 동물은 수술 후 첫날과 비교하여 장 비에 대한 복부 엽이 증가했습니다.
복부 엽의 통계적으로 유의한 증가 크기는 첫날에 비해 수술 후 36일째에 부분 간 절제술에서 회복되는 동물에서 관찰되었지만, 가짜 대조군에서는 관찰되지 않았다. 몇몇 동물은 복부 엽을 재생했습니다, 그러나 몇몇은 수술 반응에 있는 변이를 나타내는, 하지 않았습니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 부분은 복부 엽이 완전히 제거 될 수 있도록 간과 내장을 깨끗하게 분리하는 것입니다.
제브라피시의 부분 적인 간 절제술은 간 재생을 위한 유전 요구 사항을 분석하기 위하여 돌연변이 또는 형질 전환선에서 수행될 수 있습니다.
