Ce protocole permettra aux chercheurs de tirer parti des outils chimiques et génétiques disponibles pour étudier les mécanismes de régénération du foie chez le poisson zèbre. L’hépatectomie partielle permet l’ablation précise des tissus pour stimuler la régénération du foie sans avoir besoin des effets à l’échelle du corps des lésions hépatiques toxiques. Ce n’est qu’en comprenant les mécanismes moléculaires et cellulaires de la régénération du foie que nous pouvons concevoir de nouvelles thérapies pour traiter les patients atteints d’une maladie hépatique avancée.
Pour commencer, retirez les poissons du réservoir de Tricaine à l’aide de pinces et intégrez-les dans la rainure d’une éponge imbibée de Tricaine avec la face ventrale vers le haut. Placez ensuite l’éponge sous un microscope de dissection avec éclairage descendant. Pincez la peau et les écailles juste après le cœur avec une pince fine et créez un trou dans la cavité corporelle en faisant une coupe sous la pince avec le ciseau à ressort.
Faites pivoter l’éponge et faites une incision de trois à quatre millimètres le long de l’abdomen en coupant postéralement vers les nageoires pelviennes. Ensuite, faites pivoter l’éponge vers l’arrière. Pressez les côtés de l’éponge d’une main pour forcer les organes viscéraux à sortir de la cavité corporelle.
Le lobe ventral du foie est présent sur le dessus de l’intestin, et le foie est une structure rose ou orange répartie sur l’intestin brun doré, et peut être clairement visualisé avec la fluorescence CFP. Pressez les pinces fines pour que les dents se touchent et faites glisser les dents entre le foie et l’intestin. Ensuite, séparez lentement les dents pour briser les attaches de la veine porte entre le foie et l’intestin.
Répétez ce processus jusqu’à ce que toutes les connexions portales entre le foie et l’intestin aient été sectionnés, et tirez le lobe ventral de l’intestin à l’aide d’une pince fine. Couper le lobe ventral libre du reste du foie. L’examen de l’animal avec la fluorescence de CFP démontre que le lobe ventral a été enlevé.
Lorsque vous avez terminé, transférez soigneusement le poisson de l’éponge dans le réservoir contenant l’eau du système et faites couler l’eau du système sur les branchies pendant quelques minutes jusqu’à ce que le poisson se rétablisse et nage tout seul. Après avoir euthanasié le poisson, retirez-le de l’eau glacée. Placez-le dans la rainure d’une éponge avec la face ventrale vers le haut et faites une incision de la paroi ventrale du corps à la position postérieure antérieure du cœur.
Ensuite, faites deux autres incisions à partir des bords de la première incision qui longent l’axe postérieur antérieur jusqu’aux nageoires pelviennes, et épluchez la peau et le muscle pour révéler les organes viscéraux. Les organes viscéraux peuvent maintenant être visualisés avec la microscopie à champ lumineux et à fluorescence. Le rétablissement du foie après une hépatectomie partielle a été estimé en calculant le rapport foie/poids corporel, qui était de 1,8 % pour les hommes et de 3,3 % pour les femmes.
Le rapport foie/poids corporel des deux sexes a été déterminé au jour zéro après la chirurgie et au septième jour dans les contrôles partiels d’hépatectomie et de feinte. Au jour zéro de post-chirurgie, les animaux factices ont un lobe ventral visible, mais chez les animaux d’hépatectomie partielle, le lobe ventral était complètement absent, ce qui a entraîné une réduction de 30% chez les mâles et une réduction de 20% chez les femelles des rapports foie/poids corporel. Au jour de poteau-chirurgie sept chez les animaux partiels de hepatectomy, le lobe ventral n’a pas été régénéré, et le foie aux rapports de poids corporel dans les contrôles partiels de hepatectomy et de feinte étaient comparables, indiquant la masse retrouvée de foie après hepatectomy partiel.
L’effet du temps sur la régénération ventrale de lobe a été déterminé en exécutant un plein hepatectomy 1/3 partiel et en mesurant le lobe ventral au rapport de longueur d’intestin. Le lobe ventral a occupé 50 à 100% de la longueur d’intestin dans des commandes de feinte, mais a été sévèrement réduit chez 1/3 des animaux hepatectomy partiels. Les animaux hepatectomy partiels au jour 36 de poteau-chirurgie ont eu un lobe ventral accru au rapport d’intestin par rapport au premier jour de poteau-chirurgie.
On a observé une plus grande taille statistiquement significative du lobe ventral chez les animaux récupérant de hepatectomy partiel au jour 36 de poteau-chirurgie par rapport au premier jour, mais pas dans les contrôles de feinte. Certains animaux ont régénéré le lobe ventral, mais d’autres non, ce qui indique une variation de la réponse chirurgicale. La partie la plus critique de ce protocole est de séparer proprement le foie et l’intestin afin que le lobe ventral puisse être entièrement enlevé.
L’hépatectomie partielle chez le poisson zèbre peut être réalisée dans des lignées mutantes ou transgéniques pour analyser les besoins génétiques de la régénération du foie.
