一种有效的黑胡椒植 酸菌 接种方法

以下实验介绍了黑胡椒植株上辣椒疫霉的有效接种和精确采样方法。黑胡椒是一种典型的木本藤，是一种经济上重要的香料作物。黑胡椒生产主要受辣椒疫霉引起的根腐病的影响，严重影响了产业发展。

黑胡椒植株上辣椒疫霉菌的有效接种和精确采样系统对于研究植物与病原体的相互作用非常重要。本研究的主要目的是论证黑胡椒基部头部接种辣椒疫霉的详细方法，并为木本藤本植物的接种提供参考。这种方法为解决传统接种方法带来的不稳定提供了更好的方法，例如土壤淋湿或根部浸渍。

实验程序。黑胡椒的插条在受控环境中种植两个月。亚培养辣椒疫霉菌，并在25摄氏度下孵育五天。

在感染当天，琼脂块被针头粘住的三个孔上覆盖。最后，描述疾病症状。制备黑胡椒切割植物用于感染。

切开长度为40厘米，直径为0.5厘米的正交各向异性分支，并用无菌刀和分离器去除下部节点处的斜向性分支。切割的树枝顶部应包含两个节点和五个叶子，以减少水分损失。将上部修剪为平切口，将下部修剪为斜切口。

将黑胡椒切块的生根基质制成含有土壤和动物粪便的混合物，如牛粪，羊粪等，比例为一比一。将土壤在约121摄氏度下高压灭菌20分钟。使用直径30厘米，高50厘米的育种袋放置生根基质。

准备一个50度的斜率来填充基板。将切屑以50度的角度放置，在基板下方有三个以上的节点。它们被生根介质覆盖，辅助部分应粘在培养基上。

最后，插条被完全渗透。采用直切来插入切削。制备荚膜疫霉培养物。

选择无病马铃薯。将土豆清理干净，切成小方块。将200克土豆放入800毫升双蒸馏水中，煮沸20分钟。

然后过滤混合物。加入20克葡萄糖。用双蒸馏水将混合物填充至一升。

在滤液中加入15克琼脂粉。将培养基分配到烧瓶中，并使用帕拉膜密封。将培养基在121摄氏度下高压灭菌20分钟。

将计算出的培养基的马铃薯琼脂分配到培养皿中，并在无菌工作台上冷却以进行凝固。接种针通过使用酒精燃烧灯加热并冷却几秒钟进行消毒。使用无菌接种取小块真菌样品并置于PDA上。

菌丝体覆盖了大约四分之三的板块。培养物已准备好进行进一步的实验。黑辣椒感染。

距离基板表面五厘米的位置被认为是孵化点。孵化位置不应远离根部，旨在避免延长感染时间。针刺的详细步骤如下。

使用塞子螟收集荚膜菌的菌丝体颗粒。值得注意的是，在板的边缘新开发的菌丝体颗粒因其较高的感染活性而被优先选择。使用75%乙醇对茎进行灭菌，并使用接种针在灭菌位置取三个三角形孔。

用接种针卡住接种部位的3个三角形孔，3个孔隙上覆盖菌丝颗粒。八小时后，毛孔一般变黑。随着孵育时间的延长，扩张期扩大。

七到十天后，叶子变黄并脱落，直到黑胡椒死亡。结果如下。感染后，黑胡椒植物会出现症状，包括叶变黄和枯萎，木质部褐变和血管变黑。

与对照组相比，大多数基因在接种衣帽疫杆菌后表达不同。感染组织的组织病理学分析表明，辣椒疫霉菌定植于木质部。结论。在这项研究中，使用针刺基头使其受损以提供有效的接种，并在黑胡椒中加倍系统。

同时，该协议也代表了一种更有效的方式，为孵化提供了参考 - 我们的方法可以给予更多的时间和更简短的操作。该协议提供了更好的结果，使一种植物与土壤传播的病原体之间能够产生强烈的相互作用。这是可见的，便于检测植物与其病原体之间的动态过程。

在我们的方法中，我们开始刺针黑胡椒植物的基部头部以使其损坏它们。然后，将受损区域直接覆盖在荚果疫霉上，并保持水分。因此，病原体可以感染植物。

我们还为研究农业精准育种中植物与其他土源性植物病原菌的作用方式提供了一种有前景的途径。