הניסוי הבא מציג חיסון יעיל ושיטת דגימה מדויקת עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור. פלפל שחור, שהוא גפן עצית טיפוסית, הוא גידול תבלינים חשוב מבחינה כלכלית. ייצור הפלפל השחור מושפע בעיקר ממחלת ריקבון השורשים הנגרמת על ידי Phytophthora capsici, והשפיע קשות על ההתפתחות התעשייתית.
חיסון יעיל ומערכת דגימה מדויקת של Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור חשובים לחקר האינטראקציה בין צמחים לפתוגנים. המטרה העיקרית של מחקר זה היא להדגים מתודולוגיה מפורטת שבה ראש הבסיס של פלפל שחור חוסן עם Phytophthora capsici, וגם לספק התייחסות לחיסון של צמחי גפן עציים. שיטה זו מספקת דרך טובה יותר לפתור את חוסר היציבות שמביאה שיטת החיסון המסורתית, כגון טבילת קרקע או טבילת שורשים.
הליכים ניסיוניים. גזרי הפלפלים השחורים נשתלים בסביבה המבוקרת במשך חודשיים. תת-תרבות את הקפסול של פיטופתורה, ודגירה במשך חמישה ימים מתחת ל-25 מעלות צלזיוס.
ביום ההדבקה, גושי האגר מכוסים בשלושת החורים שהודבקו על ידי המחט. ולבסוף, לאפיין את הסימפטומים של המחלה. הכנת צמחי חיתוך פלפל שחור לזיהום.
חתכו ענפים אורתוטרופיים באורך של 40 ס"מ ובקוטר של 0.5 ס"מ, והסירו ענפים פלגיוטרופיים בצמתים התחתונים על ידי סכין סטרילית וסקטאור. הענף החתוך צריך להכיל שני צמתים וחמישה עלים בחלק העליון כדי להפחית את אובדן המים. חותכים את החלק העליון לחיתוך שטוח ואת החלק התחתון לחיתוך אלכסוני.
מצע ההשתרשות של חיתוך הפלפל השחור הוכן לתערובת, המכילה אדמה וזבל בעלי חיים, כגון גללי פרות, גללי כבשים וכו ', ביחס של אחד לאחד. האדמה הייתה אוטוקלבית בטמפרטורה של כ-121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. השתמשו בשקיות הרבייה בקוטר 30 ס"מ ובגובה של 50 סנטימטרים כדי למקם את מצעי ההשתרשות.
הכינו שיפוע של 50 מעלות כדי למלא את המצעים. החיתוכים הונחו בזווית של 50 מעלות, עם יותר משלושה צמתים מתחת למצע. הם היו מכוסים במדיום ההשתרשות וחלק העזר צריך להיצמד למדיום.
לבסוף, החיתוכים חדרו במלואם. חיתוך ישר אומץ כדי להכניס את החיתוך. הכנת תרביות פיטופתורה קפסיקי.
בחרו בתפוחי אדמה ללא מחלות. נקו את תפוחי האדמה וחתכו לריבועים קטנים. מניחים 200 גרם תפוחי אדמה ב 800 מיליליטר של מים מזוקקים כפול, מבושל במשך 20 דקות.
לאחר מכן סנן את התערובת. הוסף 20 גרם דקסטרוז. ממלאים את התערובת לליטר אחד במים מזוקקים כפולים.
מוסיפים 15 גרם של אבקת אגר בתפיח. מחלקים את המדיום לצלוחיות, ואטמים באמצעות Parafilm. Autoclave את המדיום ב 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.
מדיום מחושב של אגר תפוחי אדמה חולק לצלחות כלי הפטרי, והתקרר על הספסל הסטרילי לצורך התמצקות. מחט החיסון עברה חיטוי על ידי חימום באמצעות מנורת שריפת אלכוהול, וקירור למשך מספר שניות. קחו חתיכות קטנות של דגימות פטריות באמצעות חיסון סטרילי והניחו על מחשב כף יד.
התפטיר מכסה כשלושת רבעי מהצלחת. תרבויות מוכנות לניסוי נוסף. זיהום של פלפלים שחורים.
המיקום של חמישה סנטימטרים הרחק מפני השטח של המצע נחשב כמקום הדגירה. מיקום הדגירה לא צריך להיות רחוק מהשורש, במטרה למנוע הארכת זמן ההדבקה. שלבים מפורטים של pinpricking הם כדלקמן.
כדור תפטיר של Phytophthora capsici נאסף באמצעות בור פקק. יש לציין כי כדורי תפטיר שפותחו לאחרונה בקצה הצלחת נבחרו באופן מועדף בגלל פעילותם ההדבקה הגבוהה יותר. מעקרים גבעול באמצעות 75% אתנול ולוקחים שלוש נקבוביות משולשות בתנוחה המעוקרת באמצעות מחט החיסון.
שלוש נקבוביות משולשות במקום החיסון נתקעו באמצעות מחט החיסון, וכדורי תפטיר כוסו על שלוש הנקבוביות. לאחר שמונה שעות, הנקבוביות הפכו שחורות באופן כללי. ההתרחבות הורחבה עם הארכת הדגירה.
לאחר שבעה עד עשרה ימים, העלים הפכו צהובים ונשרו, עד שמתו פלפל שחור. התוצאות הייצוגיות הן כדלקמן. לאחר ההדבקה, הסימפטומים מופיעים על צמחי הפלפל השחור, כולל הצהבה וליטוף עלים, השחמה של קסילם והשחרת כלי דם.
רוב הגנים התבטאו באופן שונה לאחר החיסון עם Phytophthora capsici, בהשוואה לקבוצת הביקורת. הניתוח ההיסטופתולוגי של רקמות נגועות הדגים כי Phytophthora capsici התיישבו בקסילם. מסקנה. במחקר זה, נעשה שימוש בהצמדת ראש הבסיס כדי לגרום לו להינזק כדי לספק חיסון יעיל, ואת מערכת ההכפלה בפלפל שחור.
בינתיים, פרוטוקול זה מייצג גם דרך יעילה יותר לספק התייחסות לדגירה עם - השיטה שלנו יכולה לתת יותר זמן ולפעול בקצרה יותר. פרוטוקול זה מספק תוצאה טובה יותר, המאפשרת אינטראקציה חזקה בין צמח אחד לבין הפתוגן הנישא בקרקע. אשר נראה ונוח לזהות את התהליך הדינמי בין צמחים לבין הפתוגנים שלהם.
בשיטה שלנו אנו מתחילים להצמיד את הראש הבסיסי של צמח הפלפל השחור כדי לגרום לו להזיק להם. לאחר מכן, האזור הפגוע מכוסה ישירות ב- Phytophthora capsici, ושומר על הלחות. כך שהפתוגן יכול להדביק את הצמח.
אנו גם מספקים דרך מבטיחה לחקר אופן הפעולה בין צמחים לבין פתוגנים אחרים של צמחים הנישאים בקרקע ברבייה חקלאית מדויקת.
