다음 실험은 검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종과 정확한 샘플링 방법을 소개합니다. 전형적인 우디 포도 나무 인 검은 후추는 경제적으로 중요한 향신료 작물입니다. 검은 후추 생산은 주로 Phytophthora capsici에 의한 뿌리 썩음병의 영향을받으며 산업 발전에 심각한 영향을 미쳤습니다.
검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종과 정확한 샘플링 시스템은 식물 - 병원균 상호 작용의 연구에 중요합니다. 이 연구의 주요 목표는 검은 후추의 기저 머리에 Phytophthora capsici를 접종하고 우디 포도 나무 식물의 접종에 대한 참조를 제공하는 상세한 방법론을 입증하는 것입니다. 이 방법은 토양 침지 또는 뿌리 침지와 같은 전통적인 접종 방법에 의해 야기되는 불안정성을 해결하는 더 나은 방법을 제공한다.
실험 절차. 검은 후추의 절단은 두 달 동안 통제 된 환경에 심어집니다. 피토프토라 캡시치를 계대배양하고, 섭씨 25도 하에서 5일 동안 배양한다.
감염 당일, 한천 블록은 바늘에 붙어있는 세 개의 구멍으로 덮여 있습니다. 그리고 마지막으로, 질병 증상을 특성화하십시오. 감염에 대한 검은 후추 절단 식물의 준비.
직교 성 가지를 길이 40cm, 직경 0.5cm로 자르고 멸균 칼과 세카테로 아래쪽 마디의 표절 가지를 제거했습니다. 절단 브랜치에는 물 손실을 줄이기 위해 상단에 두 개의 노드와 다섯 개의 잎이 포함되어야합니다. 위쪽 부분을 평평한 컷으로 트리밍하고 아래쪽 부분을 비스듬한 컷으로 트림합니다.
후추 절단의 뿌리 기질은 토양 및 동물 분뇨, 예를 들어 소 배설물, 양 배설물, et cetera를 일대일의 비율로 함유하는 혼합물로 제조되었다. 토양은 약 섭씨 121도에서 20분 동안 오토클레이브되었다. 직경 30cm, 높이 50cm의 번식 백을 사용하여 응원 받침대를 놓습니다.
기판을 채우기 위해 50 도의 경사를 준비하십시오. 절단은 50도 각도로 배치되었으며 기판 아래에 세 개 이상의 노드가 있습니다. 그들은 응원 매체로 덮여 있었고 보조 부분은 매체에 달라 붙어야합니다.
마지막으로, 절단은 완전히 침투되었습니다. 직선 절단은 절단을 삽입하기 위해 채택되었다. Phytophthora capsici 배양물의 준비.
질병이없는 감자를 선택하십시오. 감자를 청소하고 작은 사각형으로 자릅니다. 감자 200 그램을 이중 증류수 800 밀리리터에 넣고 20 분 동안 끓입니다.
그런 다음 혼합물을 여과하십시오. 20 그램의 덱스트로스를 넣으십시오. 혼합물을 이중 증류수로 한 리터에 채 웁니다.
여과액에 한천 분말 15 그램을 넣으십시오. 배지를 플라스크에 분배하고 파라 필름을 사용하여 밀봉하십시오. 매체를 섭씨 121도에서 20 분 동안 오토클레이브하십시오.
계산된 감자 한천 배지를 페트리 접시 플레이트에 분주하고, 응고를 위해 멸균 벤치에서 냉각시켰다. 접종 바늘을 알콜 연소 램프를 사용하여 가열하고, 수초 동안 냉각시킴으로써 위생화시켰다. 멸균 접종을 사용하여 곰팡이 샘플의 작은 조각을 가져 와서 PDA에 놓습니다.
균사체는 판의 약 세 분기를 덮는다. 문화는 추가 실험을 할 준비가 되어 있습니다. 검은 고추의 감염.
기판의 표면으로부터 다섯 센티미터 떨어진 위치는 인큐베이팅 스폿으로서 고려되었다. 인큐베이팅 위치는 뿌리에서 멀리 떨어져 있어서는 안되며, 감염 시간을 연장하는 것을 피하기 위해 목표로합니다. 핀찌르기의 자세한 단계는 다음과 같습니다.
Phytophthora capsici의 균사체 펠릿을 마개 보어를 사용하여 수집하였다. 특히, 플레이트의 가장자리에 새로 개발 된 균사체 펠릿은 더 높은 감염 활동 때문에 우선적으로 선택되었습니다. 75 % 에탄올을 사용하여 줄기를 멸균하고 접종 바늘을 사용하여 멸균 된 위치에서 세 개의 삼각형 기공을 취하십시오.
접종 장소의 세 개의 삼각형 기공이 접종 바늘을 사용하여 붙어 있었고, 균사 펠릿이 세 개의 모공에 덮여있었습니다. 여덟 시간 후, 모공은 일반적으로 검은 색으로 변했습니다. 팽창은 인큐베이션의 연장과 함께 확대되었다.
일곱에서 열흘 후, 잎은 노랗게 변하고 검은 후추가 죽을 때까지 떨어졌습니다. 발표 결과는 다음과 같다. 감염 후, 증상은 잎 황변 및 시들음, 자일렘 갈변 및 혈관 검게를 포함하여 검은 후추 식물에 나타납니다.
대부분의 유전자는 Phytophthora capsici로 접종 한 후 대조군과 비교하여 다르게 발현되었습니다. 감염된 조직의 조직병리학적 분석은 자일렘에서 콜로니화된 피토프토호라 고추를 입증하였다. 결론. 이 연구에서, 기저 머리를 핀찌르는 것은 검은 후추에서 효과적인 예방 접종 및 배가계를 제공하기 위해 손상시키는 데 사용되었습니다.
한편,이 프로토콜은 또한 인큐베이팅을위한 참조를 제공하는보다 효율적인 방법을 나타냅니다 - 우리의 방법은 더 많은 시간을 제공하고 더 간략하게 작동 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 더 나은 결과를 제공하여 한 식물과 토양 매개 병원균 간의 강력한 상호 작용을 가능하게합니다. 이는 가시적이며 식물과 병원균 사이의 역동적 인 과정을 감지하는 것이 편리합니다.
우리의 방법에서 우리는 검은 후추 식물의 기저 머리를 찌르기 시작하여 손상시킵니다. 그런 다음 손상된 부위를 Phytophthora capsici로 직접 덮고 수분을 유지했습니다. 병원균이 식물을 감염시킬 수 있도록.
우리는 또한 농업 정밀 육종에서 식물과 다른 토양 매개 식물 병원균 사이의 작용 방식을 연구하기위한 유망한 방법을 제공합니다.
