تقدم التجربة التالية طريقة تلقيح فعالة وأخذ عينات دقيقة ل Phytophthora capsici على نباتات الفلفل الأسود. الفلفل الأسود ، وهو كرمة خشبية نموذجية ، هو محصول توابل مهم اقتصاديا. يتأثر إنتاج الفلفل الأسود في الغالب بمرض تعفن الجذر الناجم عن Phytophthora capsici ، وقد أثر بشكل خطير على التنمية الصناعية.
يعد التلقيح الفعال ونظام أخذ العينات الدقيق ل Phytophthora capsici على نباتات الفلفل الأسود أمرا مهما لدراسة التفاعل بين النبات ومسببات الأمراض. الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو إظهار منهجية مفصلة تم فيها تلقيح الرأس القاعدي للفلفل الأسود ب Phytophthora capsici ، وكذلك توفير مرجع لتلقيح نباتات الكرمة الخشبية. توفر هذه الطريقة طريقة أفضل لحل عدم الاستقرار الناجم عن طريقة التلقيح التقليدية ، مثل غمر التربة أو غمس الجذر.
الإجراءات التجريبية. تزرع قصاصات الفلفل الأسود في البيئة الخاضعة للرقابة لمدة شهرين. الزراعة الفرعية Phytophthora capsici ، وتحضن لمدة خمسة أيام تحت 25 درجة مئوية.
في يوم العدوى ، يتم تغطية كتل الأجار على الثقوب الثلاثة الملتصقة بالإبرة. وأخيرا ، توصيف أعراض المرض. إعداد نباتات قطع الفلفل الأسود للعدوى.
قطع الفروع orthotropic بأطوال 40 سم ، وقطر 0.5 سم ، وإزالة الفروع الانتحال في العقد السفلية بواسطة سكين معقم وقاطع. يجب أن يحتوي فرع القطع على عقدتين وخمس أوراق في الأعلى لتقليل فقد المياه. قم بتقليم الجزء العلوي إلى قطع مسطح والجزء السفلي إلى قطع مائل.
تم تحضير ركيزة التجذير لقطع الفلفل الأسود في خليط ، يحتوي على التربة وروث الحيوانات ، مثل روث البقر وروث الأغنام وما إلى ذلك ، بنسبة واحد إلى واحد. تم تعقيم التربة عند حوالي 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. استخدم أكياس التربية التي يبلغ قطرها 30 سم وارتفاعها 50 سم لوضع ركائز التجذير.
إعداد منحدر من 50 درجة لملء الركائز. تم وضع القطع بزاوية 50 درجة ، مع أكثر من ثلاث عقد أسفل الركيزة. كانت مغطاة بوسط التجذير ويجب أن يلتصق الجزء المساعد بالوسط.
أخيرا ، تم اختراق القصاصات بالكامل. تم اعتماد القطع المستقيم لإدخال القطع. إعداد ثقافات Phytophthora capsici.
اختر البطاطس الخالية من الأمراض. تنظيف البطاطس وقطعها إلى مربعات صغيرة. ضع 200 جرام من البطاطس في 800 ملليلتر من الماء المقطر المزدوج ، وغليها لمدة 20 دقيقة.
ثم تصفية الخليط. أضف 20 جراما من سكر العنب. املأ الخليط إلى لتر واحد بالماء المقطر المزدوج.
أضف 15 جراما من مسحوق الأجار في الترشيح. وزعي الوسط في قوارير ، وختميه باستخدام Parafilm. أوتوكلاف الوسط عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
تم توزيع الوسط المحسوب من أجار البطاطس في أطباق طبق بتري ، والتبريد على المقعد المعقم للتصلب. تم تعقيم إبرة التلقيح عن طريق التسخين باستخدام مصباح حرق الكحول ، والتبريد لعدة ثوان. خذ قطعا صغيرة من عينات الفطريات باستخدام التلقيح المعقم وضعها على المساعد الشخصي الرقمي.
يغطي الميسيليوم حوالي ثلاثة أرباع اللوحة. الثقافات جاهزة لمزيد من التجارب. عدوى الفلفل الأسود.
اعتبر موقع خمسة سنتيمترات بعيدا عن سطح الركيزة بمثابة البقعة الحاضنة. يجب ألا يكون موقع الحضانة بعيدا عن الجذر ، بهدف تجنب إطالة الوقت المعدي. الخطوات التفصيلية للوخز الدبوسي هي كما يلي.
تم جمع بيليه ميسليوم من Phytophthora capsici باستخدام حفار سدادة. والجدير بالذكر أن كريات الميسيليوم المطورة حديثا على حافة اللوحة تم اختيارها بشكل تفضيلي بسبب أنشطتها المعدية العالية. قم بتعقيم جذع باستخدام 75٪ من الإيثانول وخذ ثلاث مسام مثلثة في الوضع المعقم باستخدام إبرة التلقيح.
تم تعليق ثلاث مسام مثلثة في موقع التلقيح باستخدام إبرة التلقيح ، وتم تغطية الكريات الفطرية على المسام الثلاثة. بعد ثماني ساعات ، تحولت المسام إلى اللون الأسود بشكل عام. تم توسيع التمدد مع إطالة فترة الحضانة.
بعد سبعة إلى عشرة أيام ، تحولت الأوراق إلى اللون الأصفر وسقطت ، حتى مات الفلفل الأسود. وفيما يلي النتائج التقديمية. بعد الإصابة ، تظهر الأعراض على نباتات الفلفل الأسود ، بما في ذلك اصفرار الأوراق وذبولها ، وتحمير xylem ، وسواد الأوعية.
تم التعبير عن معظم الجينات بشكل مختلف بعد التلقيح باستخدام Phytophthora capsici ، مقارنة بالمجموعة الضابطة. أظهر التحليل النسيجي المرضي للأنسجة المصابة أن Phytophthora capsici مستعمر في xylem. استنتاج. في هذه الدراسة ، تم استخدام وخز الرأس القاعدي لجعله تالفا لتوفير تلقيح فعال ، ونظام مضاعفة في الفلفل الأسود.
وفي الوقت نفسه ، يمثل هذا البروتوكول أيضا طريقة أكثر كفاءة لتوفير مرجع للاحتضان مع - يمكن لطريقتنا أن تعطي المزيد من الوقت وتعمل لفترة وجيزة. يوفر هذا البروتوكول نتيجة أفضل ، مما يتيح تفاعلا قويا بين نبات واحد ومسببات الأمراض التي تنقلها التربة. وهو مرئي ومناسب للكشف عن العملية الديناميكية بين النباتات ومسببات الأمراض.
في طريقتنا التي نبدأ في وخز الرأس القاعدي لنبات الفلفل الأسود لجعله يتلفها. بعد ذلك ، يتم تغطية المنطقة المتضررة ب Phytophthora capsici مباشرة ، والحفاظ على الرطوبة. بحيث يمكن أن يصيب العامل الممرض النبات.
كما نقدم طريقة واعدة لدراسة طريقة العمل بين النباتات وغيرها من مسببات الأمراض النباتية التي تنقلها التربة في التربية الزراعية الدقيقة.
