Il seguente esperimento introduce un'efficace inoculazione e un metodo di campionamento preciso per Phytophthora capsici sulle piante di pepe nero. Il pepe nero, che è una tipica vite legnosa, è una coltura di spezie economicamente importante. La produzione di pepe nero è principalmente influenzata dalla malattia del marciume radicale causata da Phytophthora capsici e ha seriamente influenzato lo sviluppo industriale.
Un'inoculazione efficace e un preciso sistema di campionamento per Phytophthora capsici sulle piante di pepe nero sono importanti per lo studio dell'interazione pianta-patogeno. L'obiettivo principale di questo studio è quello di dimostrare una metodologia dettagliata in cui la testa basale di pepe nero è stata inoculata con Phytophthora capsici, e anche fornire un riferimento per l'inoculazione di piante legnose di vite. Questo metodo fornisce un modo migliore per risolvere l'instabilità portata dal metodo di inoculazione tradizionale, come l'inzuppamento del terreno o l'immersione delle radici.
Procedure sperimentali. Le talee di peperoni neri vengono piantate in ambiente controllato per due mesi. Sottocultura la Phytophthora capsici e incuba per cinque giorni sotto i 25 gradi Celsius.
Il giorno dell'infezione, i blocchi di agar sono coperti sui tre fori attaccati dall'ago. E infine, caratterizzare i sintomi della malattia. Preparazione di piante da taglio al pepe nero per l'infezione.
Tagliare rami ortotropici in lunghezze di 40 centimetri e 0,5 centimetri di diametro e rimuovere rami plagiotropici nei nodi inferiori con coltello sterile e secateur. Il ramo tagliato dovrebbe contenere due nodi e cinque foglie nella parte superiore per ridurre la perdita d'acqua. Tagliate la parte superiore con un taglio piatto e la parte inferiore con un taglio obliquo.
Il substrato radicante del taglio del pepe nero è stato preparato in una miscela, contenente terra e letame animale, come sterco di mucca, sterco di pecora, eccetera, in un rapporto di uno a uno. Il terreno è stato autoclavato a circa 121 gradi Celsius per 20 minuti. Utilizzare i sacchetti di riproduzione di 30 centimetri di diametro e 50 centimetri di altezza per posizionare i substrati di radicazione.
Preparare una pendenza di 50 gradi per riempire i substrati. Le talee sono state posizionate con un angolo di 50 gradi, con più di tre nodi sotto il substrato. Erano coperti con il mezzo di radicazione e la parte ausiliaria doveva essere attaccata al mezzo.
Infine, le talee sono state completamente infiltrate. Il taglio dritto è stato adottato per inserire il taglio. Preparazione di colture di Phytophthora capsici.
Scegli patate senza malattie. Pulire le patate e tagliarle a quadratini. Mettere 200 grammi di patate in 800 millilitri di acqua doppia distillata e far bollire per 20 minuti.
Quindi filtrare la miscela. Aggiungere 20 grammi di destrosio. Riempire la miscela a un litro con acqua doppia distillata.
Aggiungere 15 grammi di polvere di agar nel filtrato. Erogare il mezzo in palloni e sigillare usando Parafilm. Autoclave il mezzo a 121 gradi Celsius per 20 minuti.
Il mezzo calcolato di agar di patate è stato erogato nelle piastre della capsula di Petri e raffreddato sul banco sterile per la solidificazione. L'ago per l'inoculazione è stato disinfettato riscaldando con lampada a combustione di alcol e raffreddando per diversi secondi. Prelevare piccoli pezzi di campioni di funghi utilizzando l'inoculazione sterile e posizionarli sul PDA.
Il micelio copre circa tre quarti della piastra. Le culture sono pronte per ulteriori esperimenti. Infezione di peperoni neri.
La posizione di cinque centimetri di distanza dalla superficie del substrato è stata considerata come il punto di incubazione. Il luogo di incubazione non deve essere lontano dalla radice, con l'obiettivo di evitare di prolungare il tempo infettivo. I passaggi dettagliati della puntura di spillo sono i seguenti.
Un pellet di micelio di Phytophthora capsici è stato raccolto utilizzando una piralide di stopper. In particolare, i pellet di micelio di nuova concezione sul bordo della piastra sono stati selezionati preferenzialmente a causa delle loro attività infettive più elevate. Sterilizzare uno stelo con etanolo al 75% e prendere tre pori triangolari in posizione sterilizzata usando l'ago per inoculazione.
Tre pori triangolari nel luogo di inoculazione sono stati bloccati usando l'ago di inoculazione e le palline miceliali sono state coperte sui tre pori. Dopo otto ore, i pori sono diventati neri in generale. La dilatazione è stata ampliata con il prolungamento dell'incubazione.
Dopo sette-dieci giorni, le foglie sono diventate gialle e cadono, fino a quando il pepe nero è morto. I risultati presentativi sono i seguenti. Dopo l'infezione, i sintomi compaiono sulle piante di pepe nero, tra cui l'ingiallimento e l'avvizzimento delle foglie, l'imbrunimento dello xilema e l'annerimento dei vasi.
La maggior parte dei geni espressi in modo diverso dopo l'inoculazione con Phytophthora capsici, rispetto al gruppo di controllo. L'analisi istopatologica dei tessuti infetti ha dimostrato phytophthora capsici colonizzata nello xilema. Conclusione. In questo studio, la puntura di spillo della testa basale è stata utilizzata per renderla danneggiata per fornire un'inoculazione efficace e il sistema di raddoppio in pepe nero.
Nel frattempo, questo protocollo rappresenta anche un modo più efficiente per fornire un riferimento per l'incubazione con-Il nostro metodo può dare più tempo e operare più brevemente. Questo protocollo fornisce risultati migliori, che consentono una forte interazione tra una pianta e l'agente patogeno trasmesso dal suolo. Che è visibile e conveniente per rilevare il processo dinamico tra le piante e i loro agenti patogeni.
Nel nostro metodo che iniziamo a pungere la testa basale della pianta di pepe nero per farle danneggiare. Quindi, l'area danneggiata viene coperta direttamente con i phytophthora capsici e mantiene l'umidità. In modo che l'agente patogeno potesse infettare la pianta.
Forniamo anche un modo promettente per lo studio della modalità d'azione tra le piante e altri patogeni vegetali trasmessi dal suolo nell'allevamento di precisione agricolo.
