L’expérience suivante introduit une inoculation efficace et une méthode d’échantillonnage précise pour Phytophthora capsici sur des plants de poivre noir. Le poivre noir, qui est une vigne ligneuse typique, est une culture d’épices économiquement importante. La production de poivre noir est principalement affectée par la pourriture des racines causée par Phytophthora capsici, et a sérieusement influencé le développement industriel.
Une inoculation efficace et un système d’échantillonnage précis de Phytophthora capsici sur les plants de poivre noir sont importants pour l’étude de l’interaction plante-pathogène. L’objectif principal de cette étude est de démontrer une méthodologie détaillée dans laquelle la tête basale du poivre noir a été inoculée avec Phytophthora capsici, et de fournir également une référence pour l’inoculation des plants de vigne ligneux. Cette méthode offre un meilleur moyen de résoudre l’instabilité apportée par la méthode d’inoculation traditionnelle, telle que le trempage du sol ou le trempage des racines.
Procédures expérimentales. Les boutures de poivrons noirs sont plantées dans un environnement contrôlé pendant deux mois. Sous-cultiver le Phytophthora capsici, et incuber pendant cinq jours sous les 25 degrés Celsius.
Le jour de l’infection, les blocs de gélose sont recouverts sur les trois trous collés par l’aiguille. Et enfin, caractériser les symptômes de la maladie. Préparation des plants de coupe de poivre noir pour l’infection.
Coupez les branches orthotropes en longueurs de 40 centimètres et 0,5 centimètre de diamètre et enlevez les branches plagiotropes aux nœuds inférieurs à l’aide d’un couteau stérile et d’un sécateur. La branche coupée doit contenir deux nœuds et cinq feuilles au sommet pour réduire la perte d’eau. Coupez la partie supérieure à une coupe plate et la partie inférieure à une coupe oblique.
Le substrat d’enracinement de la coupe du poivre noir a été préparé en un mélange contenant du sol et du fumier animal, comme de la bouse de vache, de la bouse de mouton, et cetera, dans un rapport de un pour un. Le sol a été autoclavé à environ 121 degrés Celsius pendant 20 minutes. Utilisez les sacs de reproduction de 30 centimètres de diamètre et 50 centimètres de hauteur pour placer les substrats d’enracinement.
Préparez une pente de 50 degrés pour remplir les substrats. Les boutures ont été placées à un angle de 50 degrés, avec plus de trois nœuds sous le substrat. Ils ont été recouverts du milieu d’enracinement et la partie auxiliaire doit être collée au milieu.
Enfin, les boutures ont été complètement infiltrées. La coupe droite a été adoptée pour insérer la découpe. Préparation des cultures de Phytophthora capsici.
Choisissez des pommes de terre exemptes de maladies. Nettoyez les pommes de terre et coupez-les en petits carrés. Placer 200 grammes de pommes de terre dans 800 millilitres d’eau double distillée et faire bouillir pendant 20 minutes.
Filtrer ensuite le mélange. Ajouter 20 grammes de dextrose. Remplissez le mélange à un litre avec de l’eau distillée double.
Ajouter 15 grammes de poudre d’agar dans le filtrat. Distribuer le support dans des flacons et sceller à l’aide de Parafilm. Autoclavez le milieu à 121 degrés Celsius pendant 20 minutes.
Le milieu calculé de la gélose de pomme de terre a été distribué dans les plaques de boîte de Pétri et refroidi sur le banc stérile pour la solidification. L’aiguille d’inoculation a été désinfectée en chauffant à l’aide d’une lampe à combustion d’alcool et en refroidissant pendant plusieurs secondes. Prélever de petits morceaux d’échantillons de champignons en utilisant l’inoculation stérile et les placer sur PDA.
Le mycélium recouvre environ les trois quarts de la plaque. Les cultures sont prêtes pour d’autres expériences. Infection des poivrons noirs.
L’emplacement à cinq centimètres de la surface du substrat a été considéré comme le point d’incubation. L’emplacement d’incubation ne doit pas être loin de la racine, dans le but d’éviter de prolonger le temps d’infection. Les étapes détaillées de la piqûre d’épingle sont les suivantes.
Une pastille de mycélium de Phytophthora capsici a été collectée à l’aide d’un foreur de bouchon. Notamment, les pastilles de mycélium nouvellement développées sur le bord de la plaque ont été choisies de préférence en raison de leurs activités infectieuses plus élevées. Stériliser une tige à l’aide d’éthanol à 75 % et prendre trois pores triangulaires en position stérilisée à l’aide de l’aiguille d’inoculation.
Trois pores triangulaires à l’emplacement de l’inoculation ont été coincés à l’aide de l’aiguille d’inoculation, et des pastilles mycéliennes ont été recouvertes sur les trois pores. Après huit heures, les pores sont devenus noirs en général. La dilatation a été élargie avec la prolongation de l’incubation.
Après sept à dix jours, les feuilles jaunissent et tombent, jusqu’à ce que le poivre noir meure. Les résultats présentatifs sont les suivants. Après l’infection, les symptômes apparaissent sur les plants de poivre noir, y compris le jaunissement et le flétrissement des feuilles, le brunissement du xylème et le noircissement des vaisseaux.
La plupart des gènes exprimés différemment après l’inoculation avec Phytophthora capsici, par rapport au groupe témoin. L’analyse histopathologique des tissus infectés a démontré que Phytophthora capsici colonisait le xylème. Conclusion. Dans cette étude, la piqûre d’épingle de la tête basale a été utilisée pour l’endommager afin de fournir une inoculation efficace, et le système de doublement dans le poivre noir.
En attendant, ce protocole représente également un moyen plus efficace de fournir une référence pour l’incubation avec -Notre méthode peut donner plus de temps et fonctionner plus brièvement. Ce protocole fournit de meilleurs résultats, ce qui permet une forte interaction entre une plante et l’agent pathogène transmis par le sol. Ce qui est visible et pratique pour détecter le processus dynamique entre les plantes et leurs agents pathogènes.
Dans notre méthode, nous commençons à piquer la tête basale de la plante de poivre noir pour qu’elle les endommage. Ensuite, la zone endommagée est recouverte directement du Phytophthora capsici et maintient l’humidité. Pour que l’agent pathogène puisse infecter la plante.
Nous fournissons également un moyen prometteur pour l’étude du mode d’action entre les plantes et d’autres agents pathogènes des plantes transmis par le sol dans la sélection de précision agricole.
