O experimento a seguir introduz uma inoculação eficaz e um método de amostragem preciso para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta. A pimenta-do-reino, que é uma videira amadeirada típica, é uma cultura de especiarias economicamente importante. A produção de pimenta-do-reino é afetada principalmente pela doença da podridão radicular causada pelo Phytophthora capsici, e influenciou seriamente o desenvolvimento industrial.
Uma inoculação eficaz e um sistema de amostragem preciso para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta é importante para o estudo da interação planta-patógeno. O principal objetivo deste estudo é demonstrar uma metodologia detalhada na qual a cabeça basal de pimenta preta foi inoculada com Phytophthora capsici, e também fornecer uma referência para a inoculação de plantas de videiras lenhosas. Este método fornece uma melhor maneira de resolver a instabilidade trazida pelo método tradicional de inoculação, como o encharcado de solo ou o mergulho de raízes.
Procedimentos experimentais. As estacas de pimentas-do-reino são plantadas no ambiente controlado por dois meses. Subcultura o Phytophthora capsici, e incubar por cinco dias abaixo de 25 graus Celsius.
No dia da infecção, os blocos de ágar estão cobertos pelos três buracos enfiados pela agulha. E, finalmente, caracterizar sintomas da doença. Preparação de plantas de corte de pimenta preta para infecção.
Corte os ramos ortotrópicos em comprimentos de 40 centímetros e 0,5 centímetro de diâmetro, e remova os ramos plagiotrópicos nos nódulos inferiores por faca estéril e secateur. O ramo cortado deve conter dois nós e cinco folhas na parte superior para reduzir a perda de água. Corte a parte superior a um corte plano e a parte inferior a um corte oblíquo.
O substrato de raiz do corte de pimenta preta foi preparado em uma mistura, contendo solo e estrume animal, como esterco de vaca, esterco de ovelha, etc, em uma proporção de um para um. O solo foi autoclavado a cerca de 121 graus Celsius por 20 minutos. Use os sacos de reprodução de 30 centímetros de diâmetro e 50 centímetros de altura para colocar os substratos de raiz.
Prepare uma inclinação de 50 graus para encher os substratos. As estacas foram colocadas em um ângulo de 50 graus, com mais de três nós abaixo do substrato. Foram cobertos com o meio de enraizamento e a parte auxiliar deve ficar gruda no meio.
Finalmente, as estacas foram totalmente infiltradas. O corte reto foi adotado para inserir o corte. Preparação das culturas Phytophthora capsici.
Escolha batatas livres de doenças. Limpe as batatas e corte em pequenos quadrados. Coloque 200 gramas de batatas em 800 mililitros de água dupla destilada, e fervido por 20 minutos.
Em seguida, filtre a mistura. Adicione 20 gramas de dextrose. Encha a mistura em um litro com água destilada dupla.
Adicione 15 gramas de ágar em pó no filtrado. Distribua o meio em frascos e veda usando Parafilm. Autoclave o meio a 121 graus Celsius por 20 minutos.
O meio calculado de ágar de batata foi dispensado nas placas da placa de Petri, e resfriamento no banco estéril para solidificação. A agulha de inoculação foi higienizada pelo aquecimento usando lâmpada de queima de álcool, e resfriamento por vários segundos. Pegue pequenos pedaços de amostras de fungos usando inoculação estéril e coloque em PDA.
O micélio cobre cerca de três quartos da placa. As culturas estão prontas para mais experimentos. Infecção por pimentões negros.
A localização de cinco centímetros de distância da superfície do substrato foi considerada como o ponto de incubação. O local de incubação não deve estar longe da raiz, com o objetivo de evitar prolongar o tempo infeccioso. Passos detalhados de pinpricking são os seguintes.
Uma pelota de micélio de Phytophthora capsici foi coletada usando um borer de rolha. Notavelmente, as pelotas de micélio recém-desenvolvidas na borda da placa foram preferencialmente selecionadas por causa de suas atividades infecciosas mais elevadas. Esterilize uma haste usando 75% de etanol e tome três poros triangulares na posição esterilizada usando a agulha de inoculação.
Três poros triangulares no local da inoculação foram presos usando a agulha de inoculação, e pelotas micelias foram cobertas nos três poros. Depois de oito horas, os poros ficaram pretos em geral. A dilatação foi ampliada com o prolongamento da incubação.
Depois de sete a dez dias, as folhas ficaram amarelas e cairam, até que a pimenta-do-reino morresse. Os resultados apresentados são os seguintes. Após a infecção, os sintomas aparecem nas plantas de pimenta preta, incluindo amarelamento e murcha de folhas, browning xilema e blacking de vasos.
A maioria dos genes expressou de forma diferente após a inoculação com Phytophthora capsici, em comparação com o grupo controle. A análise histopatológica dos tecidos infectados demonstrou Phytophthora capsici colonizada no xilema. Conclusão. Neste estudo, a pinpricking da cabeça basal foi usada para torná-la danificada para fornecer uma inoculação eficaz, e o sistema de duplicação em pimenta preta.
Enquanto isso, este protocolo também representa uma maneira mais eficiente de fornecer uma referência para incubar com -Nosso método pode dar mais tempo e operar mais brevemente. Este protocolo proporciona melhor resultado, o que permite uma forte interação entre uma planta e o patógeno transportado pelo solo. O que é visível e conveniente para detectar o processo dinâmico entre plantas e seus patógenos.
Em nosso método que começamos a alfinetar a cabeça basal da planta de pimenta preta para torná-la danificada. Em seguida, a área danificada é coberta diretamente com o Phytophthora capsici, e manteve a umidade. Para que o patógeno infectasse a planta.
Também fornece uma maneira promissora para o estudo do modo de ação entre plantas e outros patógenos vegetais transportados pelo solo na reprodução de precisão agrícola.
