该协议具有重要意义，因为它直接从土壤样品中分离出具有高降解潜力的真菌菌株，以被视为生物修复目的的候选菌株。该方案是一种低成本的筛选，用于寻找具有生物修复潜力的真菌。此外，它提供易于解释的结果。
由于该技术涉及处理微生物，因此使用层流柜或本生燃烧器进行无菌工作以避免污染非常重要。首先，对感兴趣的土壤进行采样，并使用两毫米网格筛分土壤，以去除任何根部和植物碎片。在层流柜下，将一克筛分的土壤加入无菌的15毫升管中。
然后，加入10毫升无菌去离子水，制成10至减1稀释液。水平摇动试管30分钟。在悬浮液沉降之前，用无菌移液管将10毫升10稀释至负1稀释液中，并将其转移到9毫升去离子水空白中，使10至减2稀释。
彻底涡旋悬浮液。同样，从10到减2稀释管做10到减3稀释。为了在选择性培养基上电镀土壤稀释液，使用具有无菌点的微量移液管收集100微升至零下3稀释液，并将其转移到腐殖质琼脂培养皿上。
使用无菌的一次性L形细胞扩张器将稀释液均匀地分布在培养皿表面上。准备四到五道这样的菜肴。同样，从10到减去3的稀释管制备木质纤维素培养皿。
让培养皿风干10至15分钟，然后在25摄氏度的黑暗中孵育15天。检查存在的所有真菌菌落的相似性。如有必要，准备一张载玻片，在光学显微镜下观察。
在层流柜下或本生燃烧器中，用无菌接种针从菌落中轻轻去除一小部分菌丝体，从而分离每个选定的真菌菌株。将分离的菌落转移到新的麦芽提取物琼脂或MEA培养皿中。将 20 毫升 Bushnell Haas 或 BH 培养基转移到 50 毫升玻璃瓶中。
将七毫升去离子水转移到15毫升小瓶中，并在每个小瓶中加入破碎的玻璃盖玻片。通过在121摄氏度高压灭菌20分钟对小瓶进行灭菌。为了测试凡士林的生长，使用层流柜下的无菌移液器向每个50毫升BH小瓶中加入一毫升凡士林。
保留一些仅用BH作为阴性对照的小瓶。使用无菌针头将培养基表面上的菌丝体与所选的真菌菌株一起从MEA板上取出，并将其转移到带有破碎盖玻片的15毫升玻璃瓶中。在涡流混合器上搅拌小瓶两分钟，让破碎的盖子滑动以切割真菌菌落的立方体，形成悬浮液。
用200微升悬浮液接种每个凡士林小瓶。为每个真菌菌株进行两次重复。对于阴性对照，将200微升真菌悬浮液加入仅含有BH培养基的小瓶中。
此外，用凡士林保持小瓶，不要接种任何真菌，以检查培养基中的污染。将小瓶在黑暗中孵育在25摄氏度，并在接种后15和30天后观察它们。为了测试用过的发动机油的生长，将500微升的用过的发动机油转移到BHA培养皿上，并均匀分配油。
然后，通过从MEA板中收集菌丝体来接种该板的真菌菌株。为了测试塑料上的生长，将200微升真菌悬浮液转移到96微孔板中。制作真菌菌株 - 塑料组合的三个重复。
用真菌悬浮液向每个孔中加入10毫克不同的塑料粉末。对于阴性对照，用真菌悬浮液向孔中加入200微升BH培养基。此外，对于每种塑料粉末，在一个孔中填充200微升BH溶液和10毫克每种塑料粉尘以检查污染。
在黑暗中将板在25摄氏度孵育，并在15和30天后观察它们。对于定性漆酶量热测试，准备一升马铃薯葡萄糖琼脂或PDA，并高压灭菌20分钟。高压灭菌后，当培养基冷却但仍为液体时，在层流罩下加入400微升愈创木酚并将其放入培养皿中。
通过从MEA板收集菌丝体，用真菌菌株接种PDA愈创木酚板。对于阴性对照，准备每个真菌菌株的PDA板和一个含有PDA和愈创木酚的板。在黑暗中将板在25摄氏度下孵育，并在七天后观察它们。
对于定性酯酶测试，准备一升吐温80培养基。然后，将介质放在磁力搅拌器上，而不用介质内部的搅拌棒加热。10分钟后，当所有东西都融化时，将5毫升培养基转移到20毫升无菌小瓶和高压灭菌器中。
向吐温80培养基灭菌小瓶中加入200微升真菌悬浮液。对于阴性对照，将五毫升高压灭菌的BH培养基加入20毫升小瓶中。然后，向小瓶中加入200微升真菌悬浮液。
将小瓶在25摄氏度的黑暗中孵育21天，每七天观察一次。评估了能够以凡士林，使用发动机油和塑料粉末作为唯一碳源生长的真菌菌株的百分比，并取得了不同程度的成功。真菌利用凡士林的能力被评估为受控BH和含有凡士林的菌落生长差异。
近75%的测试菌株能够使用凡士林作为其唯一的碳源，21%的菌株表现出最大的生长。还监测了仅含有BHA和存在机油的板的生长。几乎90%的菌株生长在用过的机油上，其中39%的菌株显示出最大的增长。
真菌菌落周围红褐色晕的形成表明漆酶和其他木质素溶解酶的产生更高。大约60%的真菌能够产生漆酶。此外，17%的菌株在愈创木酚培养基中菌落周围产生了强烈的黑暗光晕。
通过在吐温80培养基中形成白色沉淀物来评估酯酶活性。近60%的菌株显示出酯酶活性，13%的菌株表现出更高的沉淀形成。该方案可以定制，以筛选能够通过将感兴趣的顽固物质添加到最小的培养基中来降解任何污染物的真菌。
