该方案将颞骨处理的时间从9至10个月减少到10至14天。该技术的主要优点是可以快速评估耳病理学,在我们的例子中,这与评估COVID-19相关的中耳病理学有关。这种技术可能对颞骨的时间敏感研究特别有帮助。
将来,它可能会进一步优化用于研究内耳病理学。在尸检期间开始收获,并将颅神经急剧地分开到内耳道。做第一个骨切口,骨骼与颞骨的鳞状部分平行并仅内侧。
然后,在颞骨内侧边界进行与第一个骨平行的第二个骨切口。在前方三到四厘米处做第三个切口,平行于岩脊。接下来,使第四个切口大致平行于第三个切口,位于岩脊后两厘米处。
使用尖锐的解剖以释放沿标本下边缘附着的软组织并去除颞骨。收获后,立即将组织浸没在200至300毫升10%缓冲福尔马林中。然后,将带有双金刚石锯片的精密微锯设置为五毫米的距离。
为了快速组织脱钙,将每个标本切成三个部分,使得颞骨的中心部分厚5毫米,两端的颞骨厚度为3至5毫米。将切片放入200至300毫升0.37摩尔EDTA中,在室温下放置7至10天以进行软化。中耳粘膜和咽鼓管的苏木精和曙红染色表明,使用该方案处理后组织被保存下来。
免疫组织化学分析显示,这些组织中存在ACE2,跨膜蛋白酶丝氨酸和呋喃蛋白,为中耳呼吸道上皮中的SARS-CoV2感染提供了可能的根源。在钻石锯内适当定位颞骨组织非常重要。可以与这种方法结合使用的替代技术包括不同蛋白质的免疫组织化学,不同的组织染色和转录组学。
这项技术使我们能够快速评估COVID-19大流行期间中耳内SARS-CoV2感染中是否含有蛋白质。