חתך עצמות טמפורליות אנושיות במהירות גבוהה להערכת פתולוגיה של האוזן התיכונה הקשורה ל-COVID-19

פרוטוקול זה מפחית את הזמן לעיבוד עצם טמפורלית מ-9 ל-10 חודשים ל-10 עד 14 יום. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת הערכה מהירה של אוטופתולוגיה, אשר במקרה שלנו רלוונטית להערכת הפתולוגיה של האוזן התיכונה הקשורה ל- COVID-19. טכניקה זו עשויה להיות מועילה במיוחד למחקרים תלויי זמן של העצם הטמפורלית.

בעתיד, זה עשוי להיות מותאם עוד יותר לשימוש בחקר הפתולוגיה של האוזן הפנימית. מתחילים את הקציר במהלך הנתיחה ומחלקים את העצבים הגולגולתיים בחדות לתעלת השמיעה הפנימית. הפוך את החתך הגרמי הראשון עם האוסטאוטום במקביל לחלק הקשקשי של העצם הטמפורלית ופשוט מדיאלי.

לאחר מכן, בצע את החתך הגרמי השני במקביל לראשון בגבול המדיאלי של העצם הטמפורלית. הפוך את החתך השלישי בשלושה עד ארבעה סנטימטרים קדמי ובמקביל לרכס פטרוס. לאחר מכן, הפוך את החתך הרביעי בערך מקביל לשלישי בשני סנטימטרים אחוריים לרכס פטרוס.

השתמש בניתוח חד כדי לשחרר את הרקמה הרכה המחוברת לאורך הקצה הנחות של הדגימה ולהסיר את העצם הטמפורלית. לאחר הקציר, מיד להטביע את הרקמה ב 200 עד 300 מיליליטר של 10% פורמלין buffered. לאחר מכן, קבעו מיקרו-מסור מדויק עם שני להבי יהלום למרחק של חמישה מילימטרים.

עבור דקלסיפיקציה מהירה של רקמות, חותכים כל דגימה לשלושה חלקים כך שהחלק המרכזי של העצם הטמפורלית הוא בעובי של חמישה מילימטרים ואלה משני הצדדים הם בעובי של שלושה עד חמישה מילימטרים. מקם את החלקים ב 200 עד 300 מיליליטר של 0.37-טוחנת EDTA במשך שבעה עד 10 ימים בטמפרטורת החדר לריכוך. צביעת המטוקסילין ואאוזין של רירית האוזן התיכונה וצינור האוסטכיה הראתה כי הרקמה נשמרת לאחר העיבוד באמצעות פרוטוקול זה.

ניתוחים אימונוהיסטוכימיים הראו נוכחות של חלבוני ACE2, טרנסממברנה פרוטאז סרין ופורין בתוך רקמות אלה, וסיפקו שורש אפשרי לזיהום SARS-CoV2 באפיתל הנשימתי של האוזן התיכונה. חשוב למקם כראוי את רקמת העצם הטמפורלית בתוך מסור היהלום. טכניקות חלופיות שניתן לשלב עם שיטה זו כוללות אימונוהיסטוכימיה לחלבונים שונים, כתמי רקמות שונים ותעתיק.

טכניקה זו אפשרה לנו להעריך במהירות את נוכחותם של החלבונים המעורבים בזיהום SARS-CoV2 בתוך האוזן התיכונה במהלך מגיפת COVID-19.