COVID-19関連中耳病理の評価のための高速ヒト側頭骨切片化

このプロトコルは、時間的骨処理の時間を9〜10ヶ月から10〜14日に短縮します。この技術の主な利点は、耳病理の迅速な評価を可能にすることであり、私たちの場合、COVID-19関連中耳病理の評価に関連する。この技術は、側頭骨の時間的感受性研究に特に有用であり得る。

将来的には、内耳病理学を研究するためにさらに最適化されるかもしれない。剖検中に収穫を開始し、脳神経を内耳道に鋭く分割する。骨切り術を側頭骨の扁平上皮部分と平行に、そしてちょうど内側に骨切り込みを入れます。

次いで、側頭骨の内側境界において第1に平行な第2の骨切開を行う。3回目の切開を3〜4センチメートル前部で、ペトロス隆起に平行にする。次に、第4の切開を第3の切開とほぼ平行に、ペトロス隆起の後方2センチメートルで行う。

鋭い解剖を使用して、標本の下縁に沿って付着した軟部組織を解放し、側頭骨を除去する。収穫後、直ちに組織を200〜300ミリリットルの10%緩衝ホルマリンに浸す。次に、ツインダイヤモンドブレードを備えた精密マイクロソーを5ミリメートルの距離にセットします。

迅速な組織脱灰のために、側頭骨の中央部が5ミリメートルの厚さであり、両端のものが3〜5ミリメートルの厚さになるように、各標本を3つの部分に切断する。切片を200〜300ミリリットルの0.37モルEDTAに入れ、軟化のために室温で7〜10日間置く。中耳粘膜および耳管のヘマトキシリンおよびエオジン染色は、このプロトコールを用いた処理後に組織が保存されることを示した。

免疫組織化学的分析は、これらの組織内にACE2、膜貫通プロテアーゼセリン、およびフューリンタンパク質の存在を示し、中耳の呼吸器上皮におけるSARS-CoV2感染の可能性のある根を提供する。ダイヤモンドソー内の側頭骨組織を適切に配置することが重要です。この方法と組み合わせることができる代替技術には、異なるタンパク質、異なる組織染色、およびトランスクリプトミクスに対する免疫組織化学が含まれる。

この技術により、COVID-19パンデミック中に中耳内のSARS-CoV2感染に関与するタンパク質の存在を迅速に評価することができました。