Este protocolo reduce el tiempo para el procesamiento del hueso temporal de 9 a 10 meses a 10 a 14 días. La principal ventaja de esta técnica es que permite la evaluación rápida de la otopatología, que en nuestro caso es relevante para la evaluación de la patología del oído medio asociada a COVID-19. Esta técnica puede ser particularmente útil para estudios sensibles al tiempo del hueso temporal.
En el futuro, puede optimizarse aún más para su uso en el estudio de la patología del oído interno. Comience la cosecha durante la autopsia y divida los nervios craneales bruscamente en el canal auditivo interno. Haga la primera incisión ósea con el osteotomo paralelo y solo medial a la porción escamosa del hueso temporal.
Luego, realice la segunda incisión ósea paralela a la primera en el borde medial del hueso temporal. Haga la tercera incisión a tres o cuatro centímetros anterior y paralela a la cresta petrosa. A continuación, haga la cuarta incisión aproximadamente paralela a la tercera a dos centímetros posterior a la cresta petrosa.
Use una disección aguda para liberar el tejido blando unido a lo largo del borde inferior de la muestra y extraer el hueso temporal. Después de la cosecha, sumerja inmediatamente el tejido en 200 a 300 mililitros de formalina tamponada al 10%. Luego, coloque una microsierra de precisión con cuchillas de diamante gemelas a una distancia de cinco milímetros.
Para una rápida descalcificación del tejido, corte cada muestra en tres secciones de modo que la sección central del hueso temporal tenga cinco milímetros de grosor y las de cada extremo tengan de tres a cinco milímetros de grosor. Coloque las secciones en 200 a 300 mililitros de EDTA 0.37 molar durante siete a 10 días a temperatura ambiente para ablandar. La tinción de hematoxilina y eosina de la mucosa del oído medio y la trompa de Eustaquio mostró que el tejido se conserva después del procesamiento utilizando este protocolo.
Los análisis inmunohistoquímicos mostraron la presencia de ACE2, proteína serina transmembrana y proteínas furina dentro de estos tejidos, proporcionando una posible raíz para la infección por SARS-CoV2 en el epitelio respiratorio del oído medio. Es importante colocar adecuadamente el tejido óseo temporal dentro de la sierra de diamante. Las técnicas alternativas que se pueden combinar con este método incluyen inmunohistoquímica para diferentes proteínas, diferentes tinciones de tejido y transcriptómica.
Esta técnica nos permitió evaluar rápidamente la presencia de las proteínas implicadas en la infección por SARS-CoV2 dentro del oído medio durante la pandemia de COVID-19.
