COVID-19 관련 중이 병리학 평가를위한 고속 인간 측두골 절편

이 프로토콜은 측두골 처리 시간을 9 개월에서 10 개월에서 10 일에서 14 일로 줄입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 우리의 경우 COVID-19 관련 중이 병리학의 평가와 관련된 이토 병리학의 신속한 평가를 가능하게한다는 것입니다. 이 기술은 측두골의 시간에 민감한 연구에 특히 유용할 수 있다.

앞으로는 내이 병리학을 연구하는 데 더 최적화 될 수 있습니다. 부검 중에 수확을 시작하고 두개골 신경을 내부 청각 운하로 급격하게 나눕니다. 첫 번째 뼈 절개를 골골과 평행하게하고 측두골의 편평한 부분에 내측으로 만듭니다.

그런 다음 두 번째 뼈 절개를 측두골의 내측 경계에서 첫 번째 뼈와 평행하게 수행하십시오. 세 번째 절개를 서너 센티미터 앞쪽에 놓고 페트로우스 능선과 평행하게 만듭니다. 다음으로, 네 번째 절개를 페트로우스 능선에 두 센티미터 후방에서 세 번째 절개와 대략 평행하게 만듭니다.

날카로운 해부를 사용하여 표본의 열등한 가장자리를 따라 부착 된 연조직을 제거하고 측두골을 제거하십시오. 수확 후, 즉시 조직을 10 % 완충 포르말린의 200 ~ 300 밀리리터에 잠급니다. 그런 다음 트윈 다이아몬드 블레이드가있는 정밀 마이크로 톱을 다섯 밀리미터 거리로 설정하십시오.

신속한 조직 탈석회화를 위해 각 표본을 세 개의 섹션으로 잘라 측두골의 중앙 부분이 다섯 밀리미터 두께이고 양쪽 끝에있는 부분이 세 밀리미터에서 다섯 밀리미터 두께가되도록하십시오. 절편을 연화를 위해 실온에서 7 ~ 10 일 동안 0.37 몰 EDTA의 200 내지 300 밀리리터에 놓습니다. 중이 점막 및 유스타키오 관의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 이러한 프로토콜을 사용하여 처리 후 조직이 보존되는 것으로 나타났다.

면역 조직 화학 분석은 ACE2, 막횡단 프로테아제 세린 및 퓨린 단백질의 존재를 보여 주었고, 중이의 호흡기 상피에서 SARS-CoV2 감염의 가능한 뿌리를 제공했습니다. 측두골 조직을 다이아몬드 톱 내에 적절히 위치시키는 것이 중요합니다. 이 방법과 조합될 수 있는 대안적인 기술은 상이한 단백질, 상이한 조직 얼룩, 및 전사체학에 대한 면역조직화학을 포함한다.

이 기술을 통해 우리는 COVID-19 전염병 기간 동안 중이 내에서 SARS-CoV2 감염에 관련된 단백질의 존재를 신속하게 평가할 수있었습니다.