Questo protocollo riduce il tempo per l'elaborazione dell'osso temporale da 9 a 10 mesi a 10-14 giorni. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente la rapida valutazione dell'otopatologia, che nel nostro caso è rilevante per la valutazione della patologia dell'orecchio medio associata a COVID-19. Questa tecnica può essere particolarmente utile per studi sensibili al tempo dell'osso temporale.
In futuro, potrebbe essere ulteriormente ottimizzato per l'uso studiando la patologia dell'orecchio interno. Iniziare la raccolta durante l'autopsia e dividere bruscamente i nervi cranici nel canale uditivo interno. Fare la prima incisione ossea con l'osteotoma parallela e solo mediale alla porzione squamosa dell'osso temporale.
Quindi, eseguire la seconda incisione ossea parallela alla prima sul bordo mediale dell'osso temporale. Fai la terza incisione a tre o quattro centimetri anteriormente e parallela alla cresta petrosa. Quindi, fai la quarta incisione approssimativamente parallela alla terza a due centimetri posteriore alla cresta petrosa.
Utilizzare la dissezione acuta per liberare i tessuti molli attaccati lungo il bordo inferiore del campione e rimuovere l'osso temporale. Dopo la raccolta, immergere immediatamente il tessuto in 200-300 millilitri di formalina tamponata al 10%. Quindi, impostare una microsega di precisione con due dischi diamantati a una distanza di cinque millimetri.
Per una rapida decalcificazione dei tessuti, tagliare ogni campione in tre sezioni in modo tale che la sezione centrale dell'osso temporale abbia uno spessore di cinque millimetri e quelle su entrambe le estremità abbiano uno spessore da tre a cinque millimetri. Posizionare le sezioni in 200-300 millilitri di EDTA 0,37-molare per sette-10 giorni a temperatura ambiente per l'ammorbidimento. La colorazione di ematossilina ed eosina della mucosa dell'orecchio medio e della tromba di Eustachio ha dimostrato che il tessuto viene preservato dopo l'elaborazione utilizzando questo protocollo.
Le analisi immunoistochimiche hanno mostrato la presenza di ACE2, proteasi transmembrana e proteine furina all'interno di questi tessuti, fornendo una possibile radice per l'infezione da SARS-CoV2 nell'epitelio respiratorio dell'orecchio medio. È importante posizionare in modo appropriato il tessuto osseo temporale all'interno della sega a diamante. Tecniche alternative che possono essere combinate con questo metodo includono immunoistochimica per diverse proteine, diverse macchie di tessuto e trascrittomica.
Questa tecnica ci ha permesso di valutare rapidamente la presenza delle proteine coinvolte nell'infezione da SARS-CoV2 all'interno dell'orecchio medio durante la pandemia di COVID-19.
