用于生物医学应用的荧光寿命宏观成像仪

我们的协议通过专用探头和传感材料提供宏观物体（特别是活体动物组织和整个动物）中磷光寿命和氧气浓度的详细二维映射。这些信息对于许多研究领域都很重要。我们的协议使用集成且紧凑的成像模块，该模块在TCSPC模式下运行，并提供复杂生物样品（如生命组织）中寿命和氧气分布的简单准确的可视化。

拿起板球适配器并从不同侧面检查它。卸下正面 C 接口适配器以显示安装在板球中的 Photonis PP0360EF增强器，然后将 C 接口适配器放回原处。拆下 Cricket 的正面 C 接口适配器并插入 650 正负 50 纳米发射滤光片。

通过放回 C 接口来修复它。然后，通过环形适配器将 TPX 三凸轮摄像头模块连接到板球模块的背面。通过 C 接口适配器将镜头连接到板球模块的正面。

将 LED 连接到电源和脉冲发生器。现在，将 390 纳米超亮 LED 安装在连接到黑匣子内面包板上的柱子上。打开 LED 并聚焦，以确保对成像样品进行有效和均匀的激发。

将相机组件朝下安装在光学黑匣子顶部，朝向样品成像的载物台。将相机和 LED 连接到双脉冲发生器和四通道示波器。使用示波器和脉冲发生器上的设置，同步发送到相机和 LED 的脉冲。

利用 Cricket 装置上的特殊电缆和插座将增压器连接到标准电源，并将增益设置为 2.7 伏。将样品放在相机镜头之前。然后，打开相机和除增强器以外的所有电气模块。

激活SOFI软件以调整操作参数，如聚焦和样品对齐。在模块中，将帧曝光设置为 0.01 秒。选择无限帧并将像素操作模式设置为超过阈值的时间。

然后，转到预览并选择活动模块以打开 Medipix/Timepix 帧窗口。下一步，开始录制后，调整色标并将图像旋转到所需的方向。之后，关掉房间里的灯并打开增强器。

利用镜头和Cricket适配器的对焦功能，将相机光学元件聚焦在样品台上，以生成具有良好对比度和亮度的样品的清晰图像。焦点完成后，关闭 SOFI 软件。然后，转到终端，执行定制设计软件的命令，以二进制格式获取原始数据并关闭终端。

打开一个新终端来处理获取的数据。加载数据文件并运行数据缩减器。使用用 C 语言编写的专用程序分析后处理数据，该程序将数据写入 ICS 图像文件。

随后，使用免费提供的时间分辨成像软件打开ICS图像文件，并使用两个指数函数来拟合磷光衰减。最后，打开 适合.ICS图像文件与可用的图像分析软件。

使用查找表生成磷光寿命图像，并以伪色标对其进行编码。利用测量功能计算整个图像或感兴趣区域的平均生命周期值。显示了含氧和脱氧状态下铂八乙基卟啉染料传感器斑点的磷光强度和磷光寿命成像显微镜图像。

确保在板球内部安装了正确的发射滤光片，并使用了正确的 LED、电缆连接和脉冲设置。目前，该协议仅限于动物模型，但有可能应用于诊断和治疗与组织缺氧相关的病理状态，例如癌症，中风和炎症。