הפרוטוקול שלנו מספק מיפוי דו-ממדי מפורט של משך חיי הזרחן וריכוז החמצן בעצמים מקרוסקופיים, במיוחד רקמת בעלי חיים חיים ובעלי חיים שלמים, באמצעות גשושיות ייעודיות וחומרי חישה. מידע זה חשוב לתחומי מחקר רבים. הפרוטוקול שלנו משתמש במודול הדמיה משולב וקומפקטי הפועל במצב TCSPC ומספק הדמיה קלה ומדויקת של משך החיים וחלוקת החמצן בדגימות ביולוגיות מורכבות, כגון רקמת חיים.
קח את מתאם הקריקט ובדוק אותו מצדדים שונים. הסר את מתאם הרכבה C בצד הקדמי כדי להציג את חיישן PP0360EF Photonis השוכן בצרצר, ולאחר מכן החזר את מתאם C-mount בחזרה. הסר את מתאם ההרכבה C הקדמי של הצרצר והכנס את מסנן הפליטה 650 פלוס/מינוס 50 ננומטר.
תקן זאת על-ידי החזרת תושבת C. לאחר מכן, חבר את מודול מצלמת שלוש מצלמות TPX לחלק האחורי של מודול הקריקט באמצעות מתאמי הטבעת שלהם. חבר את העדשה לצד הקדמי של מודול Cricket באמצעות מתאם C-mount.
חבר את נורית ה- LED לספק כוח וגנרטור פולסים. כעת, הרכיבו את נורית ה-LED הבהירה במיוחד בגודל 390 ננומטר על עמוד המחובר ללוח לחם בתוך הקופסה השחורה. הפעל את נורית ה- LED ומקד אותה כדי להבטיח עירור יעיל ואחיד של הדגימה המצולמת.
הרכיבו את מכלול המצלמה על גבי הקופסה השחורה האופטית הפונה כלפי מטה לכיוון השלב שבו יצולמו הדגימות. חבר את המצלמה ואת LED לגנרטורים דו-פעימתיים ואוסילוסקופ בעל ארבעה ערוצים. באמצעות הגדרות על האוסילוסקופ ומחוללי הדופק, לסנכרן את הפולסים הנשלחים למצלמה ואת LED.
השתמש בכבל ובשקע המיוחדים ביחידת הקריקט כדי לחבר את האינטנסיפייר לספק כוח סטנדרטי והגדר את הרווח ל- 2.7 וולט. מקם את הדגימה לפני עדשת המצלמה. לאחר מכן, הפעל את המצלמה ואת כל המודולים החשמליים, למעט המפעיל.
הפעל את תוכנת SOFI כדי לכוונן את הפרמטרים התפעוליים, כגון מיקוד ויישור דגימה. במודולים, הגדר את חשיפת המסגרת ל- 0.01 שניות. בחר Infinite frames והגדר את מצב הפעולה של הפיקסלים לזמן מעל הסף.
לאחר מכן, עבור אל תצוגה מקדימה ובחר מודול פעיל כדי לפתוח את חלון המסגרות Medipix/Timepix. בשלב הבא, לאחר תחילת ההקלטה, התאם את סולם הצבעים וסובב את התמונה לכיוון הרצוי. לאחר מכן, כבו את האורות בחדר והדליקו את המזין.
מקד את אופטיקת המצלמה על במת הדגימה עם יכולות המיקוד של העדשה ומתאם הצרצרים כדי להפיק תמונות ברורות של דגימות עם ניגודיות ובהירות טובות. לאחר השלמת המיקוד, סגור את תוכנת SOFI. לאחר מכן, עבור אל המסוף, בצע את הפקודות של תוכנת העיצוב המותאם אישית כדי לרכוש את הנתונים הגולמיים בפורמט הבינארי ולסגור את המסוף.
פתח מסוף חדש כדי לעבד את הנתונים שנרכשו. טען את קובץ הנתונים והפעל את מפחית הנתונים. נתח את הנתונים שלאחר התהליך באמצעות תוכנה ייעודית הכתובה בשפת C שתכתוב את הנתונים לקובץ תמונה ICS.
לאחר מכן, פתח את קובצי התמונה של ICS באמצעות תוכנת Time Resolved Imaging הזמינה באופן חופשי, והשתמש בשתי פונקציות מעריכיות כדי להתאים לדעיכת הזרחן. לבסוף, פתח את Fitted. קבצי תמונה ICS עם תוכנת ניתוח התמונה הזמינה.
צור תמונות לכל החיים של זרחן באמצעות טבלאות בדיקת מידע וקידוד שלהן בסקאלת צבעים מדומה. השתמש בפונקציה Measure כדי לחשב את ערכי משך החיים הממוצע של התמונה כולה או של אזורי עניין. עוצמת זרחן וזרחן תמונות מיקרוסקופ הדמיה לכל החיים של נקודת חיישן הצבע פלטינום אוקטאתילפורפירין במצבים מחומצנים ולא מחומצנים מוצגים.
ודא שמסנן הפליטה הנכון מותקן בתוך הצרצר ונעשה שימוש בנורית ה- LED הנכונה, חיבורי הכבלים והגדרות הדופק. נכון לעכשיו, פרוטוקול זה מוגבל למודלים של בעלי חיים, אך ניתן ליישם אותו באופן פוטנציאלי כדי לאבחן ולטפל במצבים פתולוגיים הקשורים להיפוקסיה של רקמות, כגון סרטן, שבץ ודלקת.
