당사의 프로토콜은 전용 프로브 및 감지 재료를 통해 거시적 물체, 특히 살아있는 동물 조직 및 전체 동물의 인광 수명과 산소 농도에 대한 상세한 2D 매핑을 제공합니다. 이 정보는 많은 연구 분야에서 중요합니다. 당사의 프로토콜은 TCSPC 모드에서 작동하는 통합 및 소형 이미징 모듈을 사용하며 생명 조직과 같은 복잡한 생물학적 샘플의 수명 및 산소 분포를 쉽고 정확하게 시각화합니다.
크리켓 어댑터를 가지고 다른 쪽에서 검사하십시오. Cricket에 들어 있는 Photonis PP0360EF 증압기를 표시하기 위해 전면의 C-마운트 어댑터를 제거한 다음 C-마운트 어댑터를 다시 끼웁니다. 크리켓의 전면 C-마운트 어댑터를 제거하고 650 플러스/마이너스 50나노미터 방출 필터를 삽입합니다.
C-마운트를 다시 넣어 고정하십시오. 그런 다음 TPX 3캠 카메라 모듈을 링 어댑터를 통해 크리켓 모듈 뒷면에 연결합니다. C-마운트 어댑터를 통해 크리켓 모듈의 전면에 렌즈를 연결합니다.
LED를 전원 공급 장치 및 펄스 발생기에 연결합니다. 이제 390나노미터의 고휘도 LED를 블랙박스 내부의 브레드보드에 부착된 포스트에 장착합니다. LED를 켜고 초점을 맞춰 이미징 중인 샘플의 효과적이고 균일한 여기를 보장합니다.
광학 블랙박스 위에 카메라 어셈블리를 장착하여 s를 향하도록 합니다.tage s가 이미징됩니다. 카메라와 LED를 2펄스 발생기와 4채널 오실로스코프에 연결합니다. 오실로스코프 및 펄스 발생기의 설정을 사용하여 카메라와 LED로 전송된 펄스를 동기화합니다.
크리켓 장치의 특수 케이블과 소켓을 사용하여 증압기를 표준 전원 공급 장치에 연결하고 게인을 2.7볼트로 설정합니다. 카메라 렌즈 앞에 샘플을 놓습니다. 그런 다음 카메라와 증압기를 제외한 모든 전기 모듈을 켭니다.
SOFI 소프트웨어를 활성화하여 초점 및 시료 정렬과 같은 작동 파라미터를 조정할 수 있습니다. 모듈에서 프레임 노출을 0.01초로 설정합니다. 무한 프레임을 선택하고 픽셀 작동 모드를 임계값 초과 시간으로 설정합니다.
그런 다음 Preview(미리 보기)로 이동하여 Active module(활성 모듈)을 선택하여 Medipix/Timepix 프레임 창을 엽니다. 다음 단계에서는 녹화를 시작한 후 색상 스케일을 조정하고 이미지를 원하는 방향으로 회전합니다. 그런 다음 방의 조명을 끄고 증압기를 켭니다.
렌즈와 Cricket 어댑터의 초점 기능을 사용하여 샘플 스테이지에 카메라 광학 장치의 초점을 맞춰 대비와 밝기가 좋은 샘플의 선명한 이미지를 생성합니다. 포커스가 완료되면 SOFI 소프트웨어를 닫습니다. 그런 다음 터미널로 이동하여 맞춤형 설계 소프트웨어의 명령을 실행하여 바이너리 형식의 원시 데이터를 획득하고 터미널을 닫습니다.
수집된 데이터를 처리하기 위해 새 터미널을 엽니다. 데이터 파일을 로드하고 데이터 리듀서를 실행합니다. 데이터를 ICS 이미지 파일에 기록하는 C 언어로 작성된 전용 프로그램으로 후처리 데이터를 분석합니다.
그런 다음 무료로 사용할 수 있는 Time Resolved Imaging 소프트웨어를 사용하여 ICS 이미지 파일을 열고 두 개의 지수 함수를 사용하여 인광 감쇠에 맞춥니다. 마지막으로 Fitted를 엽니다. ICS 이미지 파일을 사용 가능한 이미지 분석 소프트웨어와 함께 사용할 수 있습니다.
룩업 테이블을 사용하여 인광 수명 이미지를 생성하고 의사 색상 스케일로 코딩합니다. 측정 기능을 사용하여 전체 이미지 또는 관심 영역에 대한 평균 수명 값을 계산합니다. 산소화 및 탈산소화 상태의 백금 옥타에틸포르피린 염료 센서 스팟의 인광 강도 및 인광 수명 이미징 현미경 이미지가 표시됩니다.
올바른 배출 필터가 크리켓 내부에 장착되어 있고 올바른 LED, 케이블 연결 및 펄스 설정이 사용되는지 확인하십시오. 현재, 이 프로토콜은 동물 모델로 제한되지만, 잠재적으로 암, 뇌졸중 및 염증과 같은 조직 저산소증과 관련된 병리학적 상태를 진단하고 치료하기 위해 적용될 수 있다.
