当社のプロトコルは、専用のプローブとセンシング材料を使用して、巨視的な物体、特に生きている動物の組織と動物全体のリン光寿命と酸素濃度の詳細な2Dマッピングを提供します。この情報は、多くの研究分野にとって重要です。当社のプロトコルは、TCSPCモードで動作する統合されたコンパクトなイメージングモジュールを使用し、生命組織などの複雑な生物学的サンプルの寿命と酸素分布を簡単かつ正確に視覚化します。
クリケットアダプターを取り、さまざまな側面から検査します。前面のCマウントアダプターを取り外して、クリケットに収納されているPhotonis PP0360EFインテンシファイアを表示してから、Cマウントアダプターを元に戻します。Cricketの前面Cマウントアダプターを取り外し、650プラスマイナス50ナノメートルの発光フィルターを挿入します。
Cマウントを元に戻して修正します。次に、TPX 3カムカメラモジュールをリングアダプターを介してクリケットモジュールの背面に接続します。Cマウントアダプターを介してレンズをクリケットモジュールの前面に接続します。
LEDを電源とパルス発生器に接続します。次に、390ナノメートルの超高輝度LEDをブラックボックス内のブレッドボードに取り付けられたポストに取り付けます。LEDをオンにして焦点を合わせ、イメージングするサンプルの効果的かつ均一な励起を確保します。
カメラアセンブリを、サンプルが画像化されるステージに向かって下を向いている光学ブラックボックスの上に取り付けます。カメラとLEDを2パルス発生器と4チャンネルオシロスコープに接続します。オシロスコープとパルス発生器の設定を使用して、カメラとLEDに送信されるパルスを同期させます。
クリケットユニットの特別なケーブルとソケットを使用して、インテンシファイアを標準電源に接続し、ゲインを2.7ボルトに設定します。サンプルをカメラレンズの前に配置します。次に、カメラとインテンシファイアを除くすべての電気モジュールの電源を入れます。
SOFIソフトウェアをアクティブにして、フォーカシングやサンプルアライメントなどの操作パラメータを調整します。モジュールで、フレーム露出を 0.01 秒に設定します。[無限フレーム] を選択し、ピクセル操作モードを [しきい値を超える時間] に設定します。
次に、[プレビュー]に移動し、[アクティブ]モジュールを選択して、[Medipix / Timepixフレーム]ウィンドウを開きます。次のステップでは、記録を開始した後、カラースケールを調整し、画像を目的の方向に回転させます。その後、部屋の照明を消し、インテンシファイアをオンにします。
レンズとクリケットアダプターのフォーカシング機能を使用して、カメラの光学系をサンプルステージに焦点を合わせ、コントラストと明るさの良いサンプルの鮮明な画像を生成します。フォーカスが完了したら、SOFIソフトウェアを閉じます。次に、ターミナルに移動し、カスタム設計ソフトウェアのコマンドを実行して、バイナリ形式の生データを取得し、ターミナルを閉じます。
集録したデータを処理するために新しいターミナルを開きます。データファイルをロードし、データレデューサーを実行します。C言語で記述された専用プログラムで後処理データを解析し、ICS画像ファイルに書き込みます。
その後、自由に利用できる時間分解イメージングソフトウェアを使用してICS画像ファイルを開き、2つの指数関数を使用して燐光減衰に適合させます。最後に、フィットを開きます。利用可能な画像解析ソフトウェアを含むICS画像ファイル。
ルックアップテーブルを使用して燐光寿命画像を生成し、それらを擬似カラースケールでコーディングします。Measure関数を使用して、画像全体または関心領域の平均寿命値を計算します。酸素化および脱酸素状態における白金オクタエチルポルフィリン色素センサースポットの燐光強度および燐光寿命イメージング顕微鏡画像が示されている。
適切な発光フィルターがクリケットの内側に取り付けられ、適切なLED、ケーブル接続、およびパルス設定が使用されていることを確認してください。現在、このプロトコルは動物モデルに限定されていますが、癌、脳卒中、炎症などの組織低酸素症に関連する病態の診断と治療に適用できる可能性があります。
